载恩度PEG-PLGA纳米粒的制备及对结肠癌的治疗作用研究

论文摘要

结肠癌是威胁人类生命的常见恶性肿瘤,近年来我国的结肠癌发病率有逐年增加的趋势。结肠癌早期症状多较轻或不明显,常被患者忽视,也易被医生漏诊和误诊,等到医院诊断明确时,大部分己属中晚期,并且已有30%B超及CT发现不了的肝转移。结肠癌的治疗仍然是以手术切除为主的综合治疗。结肠癌患者术后约50%出现转移和复发。除部分早期患者外,晚期和手术切除后的患者均需接受抗癌药物治疗,它能使患者5年生存率提高5-15%,是结肠癌综合治疗中除外科治疗后又一重要治疗措施。然而由于抗癌药物具有缺乏靶向性、体内半衰期短等缺点,大多数的抗癌药物不能发挥有效的治疗作用。纳米技术的出现对肿瘤的治疗有着深远的影响。目前很多抗癌药物包裹在胶束、脂质体、微球及纳米粒中,从而使药物达到缓释及靶向运送到肿瘤部位的目的。恩度是人重组血管内皮抑制素,具有广泛的抑制肿瘤新生血管的作用,然而半衰期较短（约1-2小时）,临床应用需多次给药,给患者造成很多痛苦及注射并发症。目前国内外对恩度缓释剂的研究较少,经检索,目前还没有可以静脉注射用的恩度纳米粒缓释剂的报道。本课题的研究目的是探讨以聚乙二醇修饰的乳酸／羟基乙酸共聚物（PEG-PLGA）为载体材料的载恩度纳米粒的合成制备,并且考察其形态特征、动物体内、体外释药特征及治疗结肠癌的作用。本课题主要分为三部分：第一部分是利用复乳法（w/o/w）制备出相应粒径的载恩度PEG-PLGA缓释纳米粒,观察其形态以及粒径分布,并研究了复乳法制备缓释纳米粒的制备工艺及影响因素。第二部分是对得到的载恩度PEG-PLGA纳米粒的体外及体内性能的研究,主要考察载药纳米粒能否发挥缓释作用,在体内能否发挥长循环及被动靶向作用。第三部分通过动物实验考察载恩度PEG-PLGA纳米粒对结肠癌的治疗作用,通过免疫组化、Western blot等方法考察肿瘤血管抑制及恩度的蓄积情况。通过单因素实验设计考察了制备复乳的剪切速度、外水相聚乙烯醇（PVA）浓度、油相外水相体积比、内水相油相体积比等因素对纳米粒形态及包封率的影响。结果表明制备复乳的搅拌速度、PVA浓度、PEG-PLGA浓度、内水相体积等都对微球的外观及包封率有显著影响。通过正交实验设计优化实验条件并及对各个影响因素进行微调,最终得到了包封率较高的载药纳米粒。并且PEG-PLGA制备的纳米粒具有较理想的药物缓释作用。体外释放时间长,稳定性、重现性良好。在体内能有效地避免了网状内皮细胞的捕获,静脉注射载恩度PEG-PLGA纳米粒后恩度的半衰期长于注射恩度的半衰期,且各组织中恩度的含量也较高,发挥了长循环的作用。载恩度的PEG-PLGA纳米粒能被动靶向作用于肿瘤组织,使肿瘤内恩度含量增加,血管内皮生长因子减少,抑瘤率增加,对结肠癌有较好的治疗作用。结论：采用可生物降解的聚合物PEG-PLGA作为载体材料,可将恩度制备成缓释纳米粒,达到了其体外及体内缓慢释放恩度的目的,并能被动靶向作用于结肠癌肿瘤,增强了恩度的治疗作用,同时本研究对载药的纳米粒的临床应用提供一定的理论依据。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 目录
• 符号说明
• 第一章 载恩度聚乙二醇修饰的聚乳酸羟基乙酸共聚物纳米粒的制备及其理化性质
• 1 材料和仪器
• 2 实验方法
• 3 实验结果
• 4 讨论
• 5 本章小结
• 第二章 载恩度聚乙二醇修饰的聚乳酸羟基乙酸共聚物纳米粒体内外释放性研究
• 1 材料与仪器
• 2 实验方法
• 3 实验结果
• 4 讨论
• 5 本章小结
• 第三章 载恩度聚乙二醇修饰的聚乳酸羟基乙酸共聚物纳米粒对结肠癌的治疗作用
• 1 材料和仪器
• 2 实验方法
• 3 实验结果
• 4 讨论
• 5 本章小结
• 结语
• 参考文献
• 综述一 靶向给药系统
• 综述二 长循环纳米粒
• 综述三 血管内皮抑制素的研究进展
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间主要的研究成果