论文摘要
目的:观察重组人内皮抑素（recombinant human endostatin, rh-ES）对大鼠角膜碱烧伤后角膜新生血管增殖的影响,并初步探讨其抑制效应及其可能的机制。方法:选择清洁型健康SD成年雄性大鼠,随机分为重组人内皮抑素治疗组和生理盐水对照组,选择右眼作为实验眼,左眼作为正常对照。建立大鼠角膜碱烧伤诱导角膜新生血管模型,碱烧伤30min后两组分别在显微镜下结膜下注射重组人内皮抑素（用PBS配制成0.2g/L的内皮抑素悬浊液）和生理盐水各12.5ul,之后隔天给药,连续给药5次,实验周期为21天。分别于烧伤后1,5,7,10,14,21天6个时间点,采用裂隙灯照相系统拍照记录CNV生长状态并计算CNV面积,通过病理组织学观察及计算机图像分析系统分析各实验组角膜情况;并应用免疫组化法比较各实验组角膜组织中微血管密度（MVD）的数量以及对角膜组织中VEGF和MMP-2的表达进行半定量检测。结果:1新生血管的生长面积:各实验组新生血管在建模后24h萌发血管芽,以后新生血管面积不断增加,至第10天各组新生血管面积达高峰,10天后新生血管生长变缓慢,渐变稀疏,逐渐退化;各时间点重组人内皮抑素治疗组新生血管面积均小于生理盐水对照组（P<0.01）。2角膜组织病理学改变:光镜下,碱烧伤角膜均有不同程度的炎症细胞浸润,可见纤维细胞增生,各实验组组炎症细胞基本一致;生理盐水对照组CNV数量多,管腔大;重组人内皮抑素治疗组CNV稀少。3微血管密度（MVD）:各实验组角膜组织中微血管密度均较正常角膜组织增加,形态不规则,分布不均,新生血管基膜不完整,重组人内皮抑素治疗组各时间点MVD数量较生理盐水对照组明显减少（P<0.01）。4正常SD大鼠角膜中表达极低的VEGF蛋白;碱烧伤后各实验组角膜各层以及新生血管内皮细胞层VEGF的表达明显增强,烧伤后各时间点重组人内皮抑素治疗组VEGF在角膜组织中的表达明显低于生理盐水对照组（P<0.01）;各实验组VEGF的表达与MVD的数量呈正相关（r1=0.768,P1< 0.05;r2=0.768,P2< 0.05）。5正常SD大鼠角膜MMP-2主要表达于上皮细胞层;碱烧伤后角膜上皮细胞、浸润的炎性细胞、基质中角膜细胞及新生血管内皮细胞表达均明显增强,碱烧伤后各时间点重组人内皮抑素治疗组MMP-2在角膜组织中血管内皮细胞上的表达明显低于生理盐水对照组,而MMP-2在两实验组角膜组织中中性粒细胞上的表达未见明显差异。结论:重组人内皮抑素可以明显抑制大鼠角膜碱烧伤角膜新生血管的生长;其抑制角膜新生血管的作用可能与下调角膜组织中VEGF、MMP-2的表达有关。
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