苯并芘对血小板功能和血栓形成的影响

论文摘要

多环芳烃（polycyclic aromatic hydrocarbons,PAHs）是含有两个或两个以上苯环的芳香族化合物。该类化合物性质稳定,污染持久,分布广泛。苯并芘（benzo（a）pyrene, BaP）是多环芳烃的代表物质,存在于汽车尾气、煤、石油、香烟等的不完全燃烧产物中,不适当的烹饪方式也会产生苯并芘。由于其分布广致癌性强,已引起普遍关注。BaP致癌毒性在过去几年中有了深入的研究。BaP可经过生物体代谢,最终降解为二氢环氧苯并芘（benzo（a）pyrene-7,8-diol-9,10-epoxide, BPDE）。BaP作为强致癌物,可与DNA结合,引起DNA损伤,基因突变,诱发癌症。BaP进入机体后,对神经及免疫系统均有影响。此外,早期的研究显示BaP能引起血栓,对心血管系统也有影响。尽管动物模型和流行病学研究都表明BaP能促进动脉粥样硬化,但确切的机制仍不清楚。血小板是血液中的有效成分之一,除正常的止血等生理功能外,在血栓形成中也起着重要作用。我们期望通过检测BaP对血小板功能及血栓形成的影响,探讨BaP致心血管疾病的机制。首先,用血小板聚集仪检测了BaP对血小板聚集的影响。通过聚集实验,我们发现10μmol/L,1μmol/L和0.1μmol/LBaP本身均不能引起血小板聚集。根据文献中细胞实验的浓度和我们的实验结果,确定10μtmol/L为BaP的工作浓度。我们用浓度为10μtmol/L的BaP孵育血小板,并分别用ADP、胶原和凝血酶刺激血小板。结果显示BaP孵育不能增强在胶原和凝血酶的刺激下的血小板聚集。但是,BaP孵育的血小板在ADP的刺激下,聚集率达到0.80±0.10,与未经BaP孵育的血小板相比有极显著差异（P<0.01）。其次,我们采用流动小室系统观察BaP对血小板粘附的影响。流动小室系统是一套由流动小室、静脉泵、医用硅胶管道和荧光显微镜构建的血液循环模型,能够很好的模拟剪切力作用下的血液状态,研究血小板粘附。我们研究了剪切率为1000s-1时,BaP对血小板粘附的影响。与溶剂对照相比,经BaP孵育的血小板的粘附显著增强（P<0.01）。流式细胞术以速度快、灵敏度高、准确性好的优点在血液研究中有着广泛的运用。由于P-选择素是反映血小板活化状态的重要指标,因此本研究中我们用流式细胞仪检测BaP对血小板P-选择素表达的影响。结果显示BaP孵育后的血小板P-选择素能在ADP诱导下表达增强（P<0.01）,而BaP孵育后的血小板P-选择素不能在凝血酶诱导下表达增强。动物血栓模型能够模拟人体疾病,有助于更好的评价药物和研究疾病机制。我们建立了FeCl3诱导小鼠颈动脉血栓模型,腹腔注射苯并芘10 mg/kg,观察BaP对小鼠血栓形成时间的影响。结果显示注射BaP的小鼠颈动脉血栓形成时间短于对照组,暗示了BaP对体内血栓形成有促进作用。通过上述研究,我们得到以下结论：BaP可促进体内血栓形成,引起血小板聚集、粘附和活化。BaP对血小板的影响可能是通过ADP介导的信号通路。

论文目录

• 致谢
• 摘要
• Abstract
• 缩略语
• 目录
• 1 引言
• 1.1 多环芳烃及其毒性研究
• 1.2 BaP及其毒性研究
• 1.3 血小板在心血管疾病中的作用
• 1.4 血栓模型
• 1.5 研究目的
• 2 材料与方法
• 2.1 实验对象
• 2.2 实验器材
• 2.3 实验试剂
• 2.4 试剂配制
• 2.5 实验方法
• 2.6 数据统计
• 3 实验结果
• 3.1 BaP对血小板聚集的影响
• 3.2 BaP对血小板粘附的影响
• 3.3 BaP对血小板P-选择素表达的影响
• 3.4 BaP对小鼠动脉血栓形成的影响
• 4 讨论
• 5 结论
• 参考文献
• 文献综述
• 参考文献
• 作者简历及在读期间所取得的科研成果