论文摘要
小柴胡汤在临床上的肝脏毒副作用近年来受到越来越多的关注,但其致肝损伤的动物体内实验报道与人体临床报道的结果并不相符,对于小柴胡汤是否具有肝毒性尚无充足的实验证据。本课题首次采用不同配伍组方的阶梯式筛选方法,对小柴胡汤复方、配伍减方、单味药材及其成分作用于体外人肝癌细胞进行毒性的初步筛选,并采用正常人肝细胞进行毒性验证,以明确小柴胡汤是否具有肝细胞毒性及其毒性来源。结果显示小柴胡汤水煎液具有肝细胞毒性;小柴胡汤中起主要毒性作用的药材为黄芩;柴胡本身无毒,但可能与黄芩协同作用并增强黄芩的毒性;半夏可减轻黄芩和柴胡的毒性作用。人肝癌细胞和正常人肝细胞的细胞活性检测结果吻合,提示采用人肝癌细胞株进行的肝细胞活性检测可能为一种良好的肝细胞毒性药物初步筛选模型,可以对大量的候选药物进行快速、简便、可靠的肝细胞毒性筛选。本课题针对小柴胡汤主要毒性药材黄芩的两个主要成分——黄芩苷和汉黄芩素,进行了人肝细胞体外毒性检测。结果显示黄芩苷对人肝细胞有一定的毒性,但其毒性贡献并不足以反映黄芩或小柴胡汤整体的肝细胞毒性,汉黄芩素的各浓度组对肝细胞均无显著毒性作用。本课题引进了细胞色素P450还原酶(CPR)组织特异性基因敲除(knockout)小鼠模型,利用此模型的肝微粒体体外孵育实验,对黄芩苷的代谢酶系进行了初步研究。结果显示黄芩苷可通过野生型和CPR基因敲除小鼠肝微粒体代谢,由于本实验中的CPR基因敲除小鼠肝微粒体不具备细胞色素P450的代谢功能,因此说明黄芩苷并不经过肝脏微粒体细胞色素P450代谢,提示可能通过其它代谢酶系代谢。
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