H9亚型禽流感病毒抗独特型抗体的研制与其免疫原性的初步分析

论文题目: H9亚型禽流感病毒抗独特型抗体的研制与其免疫原性的初步分析

论文类型: 博士论文

论文专业: 预防兽医学

作者: 李宝全

导师: 牛钟相

关键词: 禽流感病毒,抗独特型抗体,内影像,单克隆抗体,免疫保护作用

文献来源: 山东农业大学

发表年度: 2005

论文摘要: 禽流感是由禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)引起的禽类的一种急性和高度接触性传染病,广泛地流行于世界上多个国家和地区。自二十世纪九十年代以来,我国一些地区相继出现了禽流感的流行,H9N2是流行的主要亚型之一。尽管其危害不如高致病性禽流感(HPAI)严重,但其所引起的蛋鸡产蛋率下降和细菌继发感染也给养禽业造成了不小的经济损失。为了克服目前用于禽流感防治的全病毒灭活疫苗以及用于实验室诊断的全病毒抗原存在的某些弱点,本研究根据免疫网络学说的基本理论,拟制备一种能够模拟AIV抗原的抗体分子,即抗独特型抗体(anti-idiotypic antibody,抗-Id或Ab2),以期望能够在禽流感的防治或实验室诊断中有所用途。 将H9N2亚型AIV增殖,经差速离心和蔗糖密度梯度离心提纯后,灭活,免疫SPF鸡,制备高免血清并提纯免疫球蛋白G(IgG)。以此制备疫苗免疫家兔,制备高免血清并提纯其中的IgG。采用醛化红细胞亲和吸附方法分离兔源AIV抗独特型多克隆抗体(RAb2s),对其生物学和免疫化学性质进行鉴定。提纯和鉴定的结果显示,使用结合有鸡非特异性抗体的醛化红细胞能较完全地吸附掉抗同种型和同种异型抗体;提纯的RAb2s能够和鸡抗AIV抗体特异性结合,能抑制其中和活性;并对H9N2亚型AIV结合鸡抗H9N2亚型AIV抗体有竞争抑制作用。由此证实该RAb2s含有病毒抗原的“内影像”型抗体成分。 此外,对本实验室筛选制备的一种分泌H9亚型AIV IgG抗独特型抗体的杂交瘤细胞所分泌的抗体的某些免疫学性质作了初步分析,结果表明,H9N2亚型AIV能够和该mAb2竞争结合鸡抗AIV IgG,mAb2抑制抗H9血清的血凝抑制活性。以该单抗免疫SPF鸡,可以诱导产生血凝抑制抗体。以上结果表明mAb2具有模拟H9N2亚型AIV血凝素分子(HA)部分抗原性的能力。 将RAb2s和mAb2制成油乳剂疫苗,接种1周龄SPF鸡,并设全病毒灭活疫苗对照组和空白对照组。免疫后定期检测抗体消长规律,于免疫后4周用H9N2亚型AIV进行攻击,结果两个抗-Id疫苗组均被诱导产生了可以结合H9N2亚型AIV的抗体。该抗体可以中和H9N2亚型AIV的毒力,保护SPF鸡胚不受感染。攻毒10d后通过对泄殖腔病毒排放情况的检测,RAb2s疫苗组和mAb2疫苗组可以抑制部分鸡排出病毒。试验结果表明AIV抗独特型抗体对鸡具有免疫原性,能够模拟病毒抗原诱导鸡体产生针

论文目录:

英文缩略说明

中文摘要

英文摘要

前言

第一部分 文献综述

综述一 禽流感研究进展

1 禽流感的流行病学

2 禽流感病毒

3 禽流感的诊断

4 禽流感的防治

综述二 抗独特型抗体的理论与应用

1 独特型与抗独特型的基础理论

2 抗-Id的制备方法

3 抗-Id模拟抗原的分子生物学基础

4 抗-Id的应用

第二部分 研究报告

实验一 兔源H9亚型抗禽流感病毒独特型抗体的制备、提纯和性质鉴定

1 材料和方法

2 结果

3 讨论

实验二 H9亚型禽流感病毒抗独特型单克隆抗体性质的初步分析

1 材料和方法

2 结果

3 讨论

实验三 抗独特型抗体疫苗对SPF鸡免疫效果的初步研究

1 材料和方法

2 结果

3 讨论

实验四 用抗独特型抗体检测血清抗体的初步分析

1 材料和方法

2 结果

3 讨论

结论

参考文献

致谢

攻读学位期间发表论文情况

发布时间: 2005-10-11

参考文献

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