抗D-二聚体单克隆抗体的制备和鉴定

论文摘要

研究目的：血栓性疾病已经成为临床上十分常见的疾病,严重威胁着人类的生命健康,近年来其发病率渐增且发病年龄呈年轻化之势,成为当代国内外医学界研究的热点和重点之一。制备出具有效价高、纯度高、特异性强、无交叉反应、重复性好以及可无限量生产等多项优点的抗D-二聚体单克隆抗体,可以使血栓性疾病的早期诊断、抗体导向血栓显像和抗体导向溶栓等更加快速、准确、简便。方法：本实验以人源性D-二聚体标准品作为抗原常规免疫BALB/c雌鼠,取免疫小鼠的脾细胞与同系骨髓瘤细胞SP2/0作电融合,HAT选择培养出杂交瘤细胞。以D-二聚体标准品为抗原,间接ELISA法筛选出分泌抗D-二聚体抗体的杂交瘤细胞,有限稀释克隆化培养获得稳定分泌抗D-二聚体单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株。利用ELISA、Western blotting等方法鉴定抗D-二聚体单克隆抗体的特性。结果：研究筛选出2株稳定分泌抗D-二聚体的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为6A3和8A9。2株单克隆抗体的免疫球蛋白亚类均为IgG2a。通过ELISA、Western blotting等方法的鉴定,抗D-二聚体单克隆抗体能与D-二聚体发生特异性反应。结论：本实验成功制备出亲和力强、效价高,并且能特异性识别D二聚体的单克隆抗体,将为血栓性疾病的诊疗发挥重要作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 1 实验材料
• 1.1 细胞及实验动物
• 1.2 主要试剂及耗材
• 1.3 主要仪器
• 1.4 主要试剂配制
• 2 实验方法
• 2.1 动物免疫
• 2.2 细胞融合前的准备及细胞融合
• 2.3 杂交瘤阳性克隆的筛选、克隆化和诱生腹水
• 2.4 单克隆抗体特异性鉴定
• 2.5 单克隆抗体效价及Ig类、亚类测定
• 2.6 单克隆抗体的纯化
• 3 实验结果
• 3.1 杂交瘤细胞株的建立
• 3.2 单克隆抗体的特异性鉴定
• 3.3 单克隆抗体培养上清的效价
• 3.4 单克隆抗体的Ig类、亚类测定
• 3.5 单克隆抗体的纯化结果
• 4 讨论及结论
• 参考文献
• 文献综述
• 参考文献
• 致谢
• 硕士在读期间发表的论文