大青叶中4（3H）喹唑酮体外抗甲1型流感病毒和PRRS病毒的研究

论文摘要

4（3H）喹唑酮是大青叶的抗病毒有效成分之一,药理实验证明具有抗病毒、抗肿瘤、抗高血脂以及抗炎等作用。本文分别进行了4（3H）喹唑酮体外抗甲1型流感病毒和PRRS病毒的作用研究。体外抑制甲1型流感病毒的试验主要通过建立病毒感染模型,探讨4（3H）喹唑酮对甲1型流感病毒体外增殖抑制的可能机制。试验采用细胞病变观察法和MTT法,测定五个不同浓度（320、160、80、40、20μg/mL）的4（3H）喹唑酮经三种不同加药方式对用甲1型流感病毒处理的MDCK细胞的保护作用,以及通过4（3H）喹唑酮对甲1型流感病毒在细胞中增殖的影响实验和4（3H）喹唑酮体外抗甲1型流感病毒作用的时效关系实验,来评价4（3H）喹唑酮体外对甲1型流感病毒的作用效果。试验结果表明:甲1型流感病毒的TCID50为10-4.90/0.1 mL;4（3H）喹唑酮体外对MDCK细胞的最大无毒浓度为320μg/mL;最大无毒浓度范围内,4（3H）喹唑酮体外对甲1型流感病毒直接灭活作用不明显,与达菲药物对照组相比统计学差异显著（P<0.05）;对甲1型流感病毒感染细胞的阻断作用和对已进入细胞的甲1型流感病毒的抑制作用明显,与达菲药物对照组相比统计学差异不显著（P>0.05）,且抗病毒效果与药物浓度（20μg/mL -320μg/mL）呈剂量依赖关系;不同浓度的4（3H）喹唑酮均能使甲1型流感病毒的TCID50降低,最大可使TCID50由4.9最低到2.95（下降近2个数量级）;4（3H）喹唑酮在不同时间抗流感病毒呈现出不同的时效关系,但72h的作用效果最好。此外,为探讨4（3H）喹唑酮是否具有抗PRRS病毒的作用,对4（3H）喹唑酮体外抑制PRRS病毒的活性进行研究,从而为新型抗病毒药物的开发提供理论依据。实验采用与上述实验相同的分组方法、给药方式及检测方法,测定4（3H）喹唑酮对感染PRRS病毒的Marc-145细胞的保护作用。结果表明:PRRS病毒的TCID50为10-5.63/0.1 mL;4（3H）喹唑酮体外对Marc-145细胞的最大无毒浓度为80μg/mL;最大无毒浓度范围内,4（3H）喹唑酮体外直接灭活PRRS病毒、以及对病毒的阻断和抑制作用均不明显,与拉米夫定药物对照组相比统计学差异都显著（P<0.05）。上述实验结果显示:4（3H）喹唑酮在72h内具有很好的体外阻止甲1型流感病毒吸附到靶细胞和抑制甲1型流感病毒增殖的作用,但是对PRRS病毒的作用不明显。因此,本试验为临床治疗流感和蓝耳病药物的研发提供了实验依据,也为尽快找到大青叶的确切药效物质基础,实现该药材和制剂的有效评价有一定的意义。

论文目录

• 摘要
• SUMMARY
• 第一章 前言和综述
• 1 中草药抗病毒研究进展综述
• 1.1 抗病毒中药研究概况
• 1.2 中药抗病毒机理
• 1.3 中医治疗病毒性疾病的优势
• 2 流感的研究现状
• 2.1 流感流行的周期性及流感病毒的变异
• 2.2 流感病毒的流行特点
• 2.3 流行性感冒的诊断
• 2.4 全球流感急待解决的问题
• 2.5 西医治疗流感的进展
• 2.6 西医对流感病毒感染的治疗局限性
• 2.7 中草药抗流感病毒的研究进展
• 3 猪繁殖与呼吸综合症综述
• 3.1 流行病学及其特点
• 3.2 PRRS 病毒的传播途径
• 3.3 PRRS 病毒的持续感染
• 3.4 临床症状与潜伏感染
• 3.5 诊断
• 3.6 猪繁殖与呼吸综合征的防制
• 3.7 中西医抗PRRS 病毒药物的研究进展
• 4 大青叶中4（3H）喹唑酮的研究进展
• 4.1 大青叶的化学成分
• 4.2 4（3H）喹唑酮的性质
• 4.3 4（3H）喹唑酮的药理作用
• 4.4 4（3H）喹唑酮的临床应用
• 第二章 实验部分
• 实验一 4（3H）喹唑酮体外抗甲1 型流感病毒的作用研究
• 1 试验材料
• 2 试验方法
• 2.1 MDCK 细胞的培养
• 2.2 甲1 型流感病毒的增殖
• 2.3 甲1 型流感病毒TCID50 的测定
• 2.4 4（3H）喹唑酮对MDCK 细胞毒性的测定
• 2.5 4（3H）喹唑酮体外抗甲1 型流感病毒实验
• 2.6 4（3H）喹唑酮对甲1 型流感病毒在细胞中增殖的影响
• 2.7 4（3H）喹唑酮抗甲1 型流感病毒作用的时效关系
• 3 实验结果
• 3.1 三株甲1 型流感病毒株细胞法增殖后的血凝滴度结果
• 3.2 鸡胚增殖后的甲1 型流感病毒的血凝滴度结果
• 3.3 甲1 型流感病毒TCID50 的测定结果
• 3.4 4（3H）喹唑酮对MDCK 细胞毒性的测定结果
• 3.5 4（3H）喹唑酮体外抗甲1 型流感病毒结果
• 3.6 4（3H）喹唑酮对甲1 型流感病毒在细胞中增殖的影响试验结果
• 3.7 4（3H）喹唑酮抗甲1 型流感病毒作用的时效关系试验结果
• 实验二 4（3H） 喹唑酮体外抗PRRS 病毒的作用研究
• 1 试验材料
• 1.1 主要试剂
• 1.2 细胞和病毒
• 1.3 药物
• 1.4 主要仪器
• 2 试验方法
• 2.1 Marc-145 细胞的培养
• 2.2 PRRS 病毒的增殖
• 2.3 PRRS 病毒TCID50 的测定
• 2.4 4（3H）喹唑酮对Marc-145 细胞毒性的测定
• 2.5 4（3H）喹唑酮体外抗PRRS 病毒实验
• 3 实验结果
• 3.1 PRRS 病毒毒力测定结果
• 3.2 4（3H）喹唑酮对Marc-145 细胞毒性的测定结果
• 3.3 4（3H）喹唑酮体外抗PRRS 病毒的结果
• 讨论
• 1 立题依据
• 2 实验结果分析
• 2.1 4（3H）喹唑酮体外抗甲1 型流感病毒结果分析
• 2.2 4（3H）喹唑酮对甲1 型流感病毒在细胞中增殖的影响结果分析
• 2.3 4（3H）喹唑酮抗甲1 型流感病毒作用的时效关系试验结果分析
• 2.4 4（3H）喹唑酮体外抗PRRS 病毒的结果分析
• 结论
• 致谢
• 参考文献
• 导师简介
• 作者简介
• 附录1：中英文缩略词表
• 附录2：细胞培养用液的配制与消毒
• 附录3：实验图片