新型鬼臼毒素衍生物处方前及脂质体制备的研究

论文摘要

鬼臼毒素及其衍生物是具有显著生理活性的木脂素类化合物，其生理活性主要表现为抗肿瘤活性和抗病毒活性。在对鬼臼毒素及其衍生物的研究中，已经发现了一些有效的抗肿瘤药物，但仍存在耐药性，水溶性差，严重的骨髓抑制以及口服效果差等缺点。5-氟尿嘧啶是一种重要的水溶性抗代谢类药物，在临床上与多种抗肿瘤药物联合使用，以提高治疗效果，但也存在生物利用度低，毒副作用大的缺点。为了获得更加高效低毒的抗肿瘤药物，我们根据药物设计中的“拼合原理”合成了一种新型鬼臼毒素衍生物，5-氟尿嘧啶乙酸鬼臼酯（5-Fluorourcial-acetic podophyllic ester，5-FPE）。体外试验显示5-FPE具有比VP—16更强的抗肿瘤活性，极具开发价值，因此我们对其进行了进一步的研究。首先，我们进行了5-FPE的处方前的基础研究。测定了5-FPE的熔点m．p．=178—180℃；比旋光度[α]D22=-58.4°；油水分布系数lgP=0.51；纯度为99.35％；在近似溶解度试验中发现在丙酮、乙酸乙酯和乙腈中5-FPE的溶解性较好，其次是甲醇，氯仿和乙醇，在水和丙二醇中不好。建立了5-FPE的HPLC含量测定的方法和条件为：流动相：甲醇∶水=58∶42；色谱柱：Kromasil 100A C18（350×4.6mm，5um）；检测波长：271nm；流速：0.8mL·min-1；柱温为30℃；进样量为10uL。考察了5-FPE在不同条件下的稳定性，结果显示在60℃高温和4500lx光照条件下5-FPE比较稳定，但在75％RH、25℃高湿条件下稳定性降低；在甲醇（4℃）和氯仿（25℃）中比较稳定；在人工胃液和人工肠液中不稳定；在不同pH的缓冲溶液中稳定性随pH增加而降低。接着，我们进行了5-FPE的急性毒性和体内抗肿瘤活性的研究。结果表明5-FPE的急性毒性明显小于VP-16和5-FU，但对小鼠S180肉瘤的生长抑制作用较前两种化合物稍有降低。为了进一步改善5-FPE的水溶性和稳定性，我们还把5-FPE制成了脂质体并对相关性质进行了研究。采用薄膜—超声分散法制备5-FPE脂质体，以包封率作为考察指标，通过L9（34）正交试验筛选出制备工艺为：旋转蒸发温度50℃，缓冲液的用量为4mL超声功率为100％，超声时间为10min；制备处方为：5-FPE∶CH=3∶5，SPC∶CH=4∶1，PBS的pH值为7.0，CHCl3的用量为2.0mL。选用高速离心法分离游离药物和脂质体后，在建立的色谱条件下用高效液相色谱法测定了包封率。用筛选的工艺和处方制备的5-FPE脂质体平均包封率为66.45％，平均粒径为284.7nm，平均zeta电位为-22.15mv。5-FPE制成脂质体后能提高5-FPE的水溶性和稳定性。选用S180肉瘤瘤株进行了5-FPE脂质体的体内抗肿瘤活性研究，结果表明5-FPE混悬液和5-FPE脂质体大剂量组对小鼠S180肉瘤的生长有一定的抑制作用，但比VP-16和5-FU稍低。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一部分 前言和研究综述
• 一、前言
• 二、鬼臼毒素及其衍生物的研究进展
• 2.1 概述
• 2.2 鬼臼毒素类衍生物的生理活性及抗癌机理
• 2.2.1 抗肿瘤作用及机理
• 2.2.1.1 细胞有丝分裂过程中微管聚合作用机制
• 2.2.1.2 通过形成DNA-拓扑异构酶-药物分子的稳定复合物,导致DNA异常重组的作用模式
• 2.2.1.3 自由基作用机理
• 2.2.2 抗病毒作用及机理
• 三、5-氟尿嘧啶类抗肿瘤药物的研究进展
• 四、脂质体在抗肿瘤药物中的研究进展
• 第二部分 新型鬼臼毒素衍生物的化学合成
• 1.1 仪器与试药
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 5-FU乙酸的合成
• 1.2.2 5-FPE的合成
• 1.3 结果与讨论
• 第三部分 新型鬼臼毒素衍生物的处方前基础研究
• 一、新型鬼臼毒素衍生物理化性质的研究
• 1.1 仪器与试药
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 熔点和比旋光度的测定
• 1.2.2 油水分布系数的测定
• 1.2.3 药物纯度的测定
• 1.2.4 近似溶解度的测定
• 1.3 结果与讨论
• 二、新型鬼臼毒素衍生物含量测定方法和条件的建立
• 2.1 仪器与试药
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 测定波长的选择
• 2.2.2 色谱条件的确定
• 2.2.3 最低检测限的测定
• 2.2.4 标准曲线的制备
• 2.2.5 精密度的测定
• 2.2.6 回收率的测定
• 2.3 结果和讨论
• 三、新型鬼臼毒素衍生物体外稳定性研究
• 3.1 仪器与试药
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 原料药影响因素试验
• 3.2.1.1 高温试验
• 3.2.1.2 高湿度试验
• 3.2.1.3 强光照射试验
• 3.2.2 不同溶剂中的稳定性试验
• 3.2.2.1 甲醇中的稳定性
• 3.2.2.2 氯仿中的稳定性
• 3.2.2.3 蒸馏水中的稳定性
• 3.2.3 不同溶液中的稳定性
• 3.2.3.1 人工胃液、肠液中的稳定性
• 3.2.3.2 在缓冲溶液中的稳定性
• 3.2.4 血浆中的稳定性
• 3.3 结果与讨论
• 第四部分 新型鬼臼毒素衍生物的急性毒性与抗肿瘤活性研究
• 一、新型鬼臼毒素衍生物急性毒性研究
• 1.1 材料
• 1.2 实验方法
• 1.3 结果与讨论
• 二、新型鬼臼毒素衍生物体内抗肿瘤活性研究
• 2.1 材料
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 细胞复苏和传代
• 2.2.2 接种方法及分组
• 2.2.3 给药方案
• 2.2.4 实验期
• 2.2.5 采集标本
• 2.2.6 检测指标
• 2.2.7 数据分析
• 2.3 结果与讨论
• 第五部分 新型鬼臼毒素衍生物脂质体的制备及相关性质研究
• 一、新型鬼臼毒素衍生物脂质体的制备工艺与处方的研究
• 1.1 仪器与试药
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 薄膜—超声分散法制备脂质体
• 1.2.2 制备工艺的研究
• 1.2.3 制备处方的研究
• 1.2.4 脂质体质量考察
• 1.2.4.1 形态观察
• 1.2.4.2 粒径分布和Zeta电位的测定
• 1.3 结果与讨论
• 二、新型鬼臼毒素衍生物脂质体包封率测定方法的研究
• 2.1 仪器与试药
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 色谱条件
• 2.2.2 线形范围
• 2.2.3 精密度试验
• 2.2.4 回收率试验
• 2.2.5 包封率和载药量的测定
• 2.3 结果与讨论
• 三、新型鬼臼毒素衍生物脂质体体外稳定性研究
• 3.1 仪器与试药
• 3.2 实验方法
• 3.3 结果与讨论
• 四、新型鬼臼毒素衍生物脂质体体内抗肿瘤活性研究
• 4.1 材料
• 4.2 实验方法
• 4.2.1 细胞复苏和传代
• 4.2.2 接种方法及分组
• 4.2.3 给药方案
• 4.2.4 实验期
• 4.2.5 采集标本
• 4.2.6 检测指标
• 4.2.7 数据分析
• 4.3 结果与讨论
• 第六部分 附件
• 参考文献
• 论文工作小结
• 在学期间发表论文情况
• 致谢