一株产凝乳酶枯草芽孢杆菌的筛选、鉴定及其酶活性质的研究

论文摘要

干酪是以牛奶、奶油、脱脂乳、酪乳或这些产品的混合物为原料,经凝乳并分离乳清而制得的新鲜或发酵成熟的乳制品,含有丰富的营养成分。近年来其生产和消费一直保持上升的势头。凝乳酶是干酪生产过程中起凝乳作用的关键性酶。凝乳酶来源广泛,可从动物、植物和微生物中得到。但由于微生物具有来源广泛、培养方法简单、酶提取方便、生产成本低等优点,正成为新的凝乳酶的重要来源。本文即是这方面研究的一个探索,主要包括三个方面的内容:1.产凝乳酶菌株的筛选从所采集十种样品中分离纯化出的34株微生物中,筛选出能产凝乳酶的QL-2作为研究菌株。QL-2分离自十年干酪中,其发酵液具有良好的凝乳作用,凝乳活性能达到62.83SU。2.产凝乳酶菌株QL-2的系统发育分析通过形念观察、环境因素影响的测定、生长特征、生理生化特征以及16S rRNA寡核苷酸序列分析,确定产凝乳酶菌株QL-2是一株新的枯草芽孢杆菌,保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC）,保藏名Bacillus subtilis QL-2,保藏号M208023。现已对该产凝乳酶菌株向国家知识产权局申请了专利,专利申请号为2008103011093。3.产凝乳酶菌株发酵条件的优化及酶活性质研究采用正交实验研究培养温度、培养基的初始pH、装液量三个因素对产凝乳酶菌株QL-2生长和产酶活性的影响,得到产酶的适宜条件为:温度为35℃、培养基初始pH为7.0、装液量为40ml。酶活性质研究发现,产凝乳酶菌株QL-2的发酵液具有良好的凝乳活性;Ca2+能明显促进凝乳活力;底物pH值为5.8时酶液的凝乳速度最快;酶液凝乳活力的最适反应温度为60℃。

论文目录

• 缩略词表
• 中文摘要
• Abstract
• 第一部分 文献综述
• 1 干酪的营养价值、应用及在我国的发展
• 1.1 干酪的营养价值
• 1.2 干酪的历史及生产消费情况
• 1.3 干酪生产在我国的发展
• 2 凝乳酶的凝乳机理、影响因素及其来源
• 2.1 凝乳酶的凝乳机理
• 2.2 影响凝乳酶凝乳的因素
• 2.2.1 pH值对凝乳酶活性的影响
• 2.2.2 温度对凝乳酶活性的影响
• 2.2.3 钙离子对凝乳酶活性的影响
• 2.2.4 其它因素的影响
• 2.3 凝乳酶的来源
• 2.3.1 动物来源的凝乳酶
• 2.3.2 植物来源的凝乳酶
• 2.3.3 微生物来源的凝乳酶
• 2.3.4 基因工程凝乳酶
• 3 枯草芽孢杆菌的分类学研究和应用
• 3.1 枯草芽孢杆菌的分类学研究
• 3.2 枯草芽孢杆菌的应用
• 3.2.1 食品工业中的应用
• 3.2.2 饲料工业中的应用
• 3.2.3 医药中的应用
• 3.2.4 洗涤剂中的应用
• 3.2.5 纺织工业中的应用
• 3.2.6 皮革工业中的应用
• 3.2.7 造纸工业中的应用
• 4 细菌鉴定与分类方法
• 4.1 传统分类鉴定
• 4.2 数值鉴定和自动化鉴定
• 4.3 核酸分子生物学分类鉴定
• 5 立论依据及研究目的
• 第二部分 产凝乳酶菌株的分离、纯化和筛选
• 1 材料和方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 1.2.1 样品采集
• 1.2.2 微生物的分离纯化
• 1.2.3 细菌的保存
• 1.2.4 产凝乳酶菌株的筛选
• 1.2.4.1 平板初筛
• 1.2.4.2 发酵复筛
• 1.2.4.3 凝乳酶活力测定方法
• 2 实验结果和分析
• 2.1 微生物的分离纯化
• 2.2 平板初筛
• 2.3 发酵复筛
• 3.讨论
• 第三部分 产凝乳酶细菌的分类鉴定
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 供试菌株
• 1.1.2 培养基
• 1.2 方法
• 1.2.1 传统分类鉴定法
• 1.2.1.1 菌体形态
• 1.2.1.2 环境因素对产凝乳酶菌株的影响
• 1.2.1.3 产凝乳酶菌株的生理生化反应
• 1.2.1.4 产凝乳酶菌株的生长特征
• 1.2.2 现代分子生物学分类鉴定
• 2 实验结果和分析
• 2.1 传统分类鉴定法
• 2.1.1 菌体形态
• 2.1.2 环境因素对产凝乳酶菌株的影响
• 2对产凝乳酶菌株的影响'>2.1.2.1 O₂对产凝乳酶菌株的影响
• 2.1.2.2 温度对产凝乳酶菌株的影响
• 2.1.2.3 渗透压对产凝乳酶菌株的影响
• 2.1.2.4 pH对产凝乳酶菌株的影响
• 2.1.3 产凝乳酶菌株生理生化反应
• 2.1.4 产凝乳酶菌株生长特征
• 2.1.4.1 产凝乳酶菌株的标准曲线
• 2.1.4.2 产凝乳酶菌株的生长曲线
• 2.2 现代分子生物学分类鉴定
• 2.2.1 产凝乳酶菌株QL-2 16S rRNA序列分析
• 2.2.2 产凝乳酶菌株QL-2系统发育分析
• 3.讨论
• 第四部分 产凝乳酶菌株发酵条件的优化及酶活性质研究
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 供试菌株
• 1.1.2 培养基
• 1.2 方法
• 1.2.1 产凝乳酶菌株发酵条件的优化
• 1.2.2 酶活性质研究
• 1.2.3 菌株产凝乳酶的活性及其发酵液的凝乳活性
• 1.2.3.1 菌株发酵液的凝乳活性
• 1.2.3.2 菌株产凝乳酶的活性
• 1.2.3.3 菌株发酵液中凝乳酶的含量
• 2 实验结果和分析
• 2.1 产凝乳酶菌株发酵条件的优化
• 2.2 酶活性质研究
• 2.3 菌株产凝乳酶的活性及其发酵液的凝乳活性
• 2.3.1 菌株发酵液的凝乳活性
• 2.3.2 菌株产凝乳酶的活性
• 2.3.3 菌株发酵液中凝乳酶的含量
• 2.3.3.1 凝乳酶标准曲线的测定
• 2.3.3.2 菌株发酵液中凝乳酶的含量
• 3 讨论
• 第五部分 结论与展望
• 1.结论
• 2.展望
• 参考文献
• 在学期间研究成果
• 致谢