百日咳杆菌免疫学和分子生物学检测方法的建立及疫苗株基因序列分析

论文题目: 百日咳杆菌免疫学和分子生物学检测方法的建立及疫苗株基因序列分析

论文类型: 硕士论文

论文专业: 免疫学

作者: 徐颖华

导师: 雷殿良,张庶民

关键词: 无细胞百日咳疫苗,百日咳毒素,丝状血凝素,单克隆抗体,荧光定量,序列分析

文献来源: 中国药品生物制品检定所

发表年度: 2005

论文摘要: 尽管现在世界上绝大多数国家实施百日咳疫苗的免疫接种，使百日咳感染率和病死率大大下降，但据世界卫生组织（WHO）统计报道，现在全世界每年百日咳患者达数四千万之多，且绝大多数病例来自不发达国家和发展中国家，因此百日咳越来越引起人们重视。百日咳疫苗是预防和控制百日咳的最有效方法。百日咳疫苗包括全细胞疫苗和无细胞百日咳疫苗，由于全细胞疫苗所引起的接种副反应较为严重，将逐渐被接种副反应小而免疫效果好，以百日咳杆菌的两种主要抗原即百日咳毒素（pertussis toxin，PT）和丝状血凝素（filamentous hemagglutinin，FHA）为主要成分的无细胞百日咳疫苗所代替。然而在无细胞疫苗各组分的制备和质量控制等方面，目前还存在一些问题有待于研究和解决，其中之一即尚无一种很好的有效抗原定量检测方法。本课题采用杂交瘤单克隆技术，运用已建立的间接ELISA法筛选，获得七株分泌抗百日咳毒素（PT）单克隆抗体（monoclonal antibody，McAb）的杂交瘤细胞株和六株抗百日咳丝状血凝素（FHA）McAbs的杂交瘤细胞株，两种杂交瘤细胞株分泌单克隆抗体的Ig类别均为IgG1（κ），效价达1：105—1：107，各株抗PT McAbs能特异性识别PT，与FHA及C型肠毒素无交叉反应，其中McAb1D4和3E4有中和抑制PT簇集CHO细胞的活性，Western blot结果表明2D7、5F9、5F8、1D4和2C25株McAbs均能识别PT抗原的S1亚单位蛋白，McAb 1B8可识别S2亚单位蛋白，McAb 3E4可识别S3亚单位蛋白。6株抗FHA-McAbs均能特异性识别FHA，与流感病毒血凝素及PT无交叉反应，其中McAb 2C2、2G6、1EA和1C7能特异性抑制FHA血凝活性，血凝抑制效价分别为1：64，1：128，1：256

论文目录:

中文摘要

英文摘要

前言

第一部分:抗百日咳毒素和抗丝状血凝素的单克隆抗体的制备及应用研究

材料和方法

结果

1.分泌特异性McAb杂交瘤细胞株的建立

2.McAb的特性鉴定及纯化

3.夹心ELISA法的建立

4.初步应用

讨论

小结

第二部分:荧光定量PCR检测百日咳杆菌方法的建立

材料和方法

结果

1.定量对照模板的制备

2.标准曲线的绘制

3.方法学评价

讨论

小结

第三部分:中国百日咳疫苗生产株S1和Prn蛋白基因序列分析

材料和方法

结果

1.PCR扩增和产物的克隆

2.S1蛋白基因序列分析

3.Prn蛋白基因序列分析

4.S1和Prn蛋白基因进化分析

讨论

小结

参考文献

论文综述(一)

论文综述(二)

附录Ⅰ

附录Ⅱ

附录Ⅲ

致谢

发布时间: 2007-03-20

参考文献

[1].百日咳杆菌粘着素和菌毛的克隆、表达及免疫原性和保护性研究[D]. 王雅英.中国药品生物制品检定所2006
[2].百日咳基因工程亚单位疫苗的实验研究[D]. 章金勇.第三军医大学2008
[3].无细胞百日咳组份疫苗脱毒及去脱毒剂工艺研究[D]. 张纯洁.北京理工大学2015
[4].重组百日咳鲍特氏菌腺苷酸环化酶毒素的特性分析及其检测方法研究[D]. 张平.中国食品药品检定研究院2013
[5].百日咳腺苷酸环化酶毒素基因的克隆、原核表达、纯化及初步鉴定[D]. 石碧珠.广东药学院2010
[6].重组百日咳杆菌毒素S1亚单位及其突变体的克隆表达和生物学性质研究[D]. 张晓丽.第三军医大学2007
[7].百日咳丝状血凝素（FHA）的纯化、抗-FHA单克隆抗体的研制及初步应用[D]. 陈雯.武汉生物制品研究所2010

百日咳杆菌免疫学和分子生物学检测方法的建立及疫苗株基因序列分析

猜你喜欢