真菌漆酶的生产及在催化氧化茶多酚中的应用基础研究

论文摘要

本实验在液体发酵条件下对漆酶生产菌株进行选育,以α-奈酚和愈创木酚作为初筛指示剂,用ABTS进行复筛,筛选出一株杏鲍菇菌株（Pleurotus erygii）,其发酵周期适中,产酶量相对较高。进一步通过单因素和正交试验对其培养基成分和培养条件进行优化,结果表明,杏鲍菇发酵的适宜培养基成份为（1000mL）:马铃薯200g,葡萄糖5g,黄豆粉8g, Cu2SO40.033g, MgSO4-7H2O1.5g, KH2PO43g;适宜发酵条件为：装液量120ml/250ml,接种量9%,初始pH值.5.0。优化后漆酶产量可达5.207U/mL,约为优化前的4.1倍,且产酶高峰期比优化前提前了4天。对杏鲍菇所产漆酶的酶学性质进行了研究,结果表明：在以ABTS为底物时,漆酶的最适反应温度为60℃,最适反应pH值为4.0；在温度25℃～45℃,pH5.0～7.0间漆酶的稳定性较好。米氏常数Km=229.42μM, Vmax=18.21μM/mino lmM的Pb2+对漆酶的诱导作用最明显,酶活力为空白对照的126.8%；抑制作用最明显的为Fe2+,酶活力约为对照的3.10%。进一步对漆酶在茶多酚催化氧化中的应用进行了基础性研究,结果表明：杏鲍菇漆酶能有效地将绿茶中的茶多酚转化为茶色素,反应后茶黄素、茶红素和茶褐素均有明显提高。在温度55℃,pH值4.5,底物浓度4g/L,酶用量0.2U/mL的条件下反应90分钟,最利于茶黄素的生成,其含量约为反应前的5.4倍。试验表明利用漆酶的氧化作用可有效提高红茶茶汤的品质,这一结果显示出良好的应用前景和潜在商业价值。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 目录
• 第一章 文献综述
• 1.1 漆酶概述
• 1.2 漆酶的基础研究
• 1.2.1 漆酶的来源
• 1.2.2 漆酶的结构
• 1.2.3 漆酶的催化氧化
• 1.2.4 漆酶的酶活测定方法
• 1.3 漆酶的应用研究
• 1.3.1 制浆漂白
• 1.3.2 废纸回收
• 1.3.3 纺织
• 1.3.4 污染物的降解
• 1.3.5 食品工业中的应用
• 1.4 本课题的研究内容和意义
• 第二章 漆酶生产菌株的选育
• 2.1 前言
• 2.2 材料和方法
• 2.2.1 材料
• 2.2.2 实验方法
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 初筛
• 2.3.2 复筛
• 2.4 本章小结
• 第三章 杏鲍菇液体发酵生产漆酶的条件优化
• 3.1 引言
• 3.2 材料与方法
• 3.2.1 材料
• 3.2.2 实验方法
• 3.3 结果和讨论
• 3.3.1 装液量对漆酶生产的影响
• 3.3.2 接种量对漆酶生产的影响
• 3.3.3 初始pH值对漆酶生产的影响
• 3.3.4 碳源对漆酶生产的影响
• 3.3.5 碳源浓度对漆酶生产的影响
• 3.3.6 氮源对漆酶生产的影响
• 3.3.7 氮源浓度对漆酶生产的影响
• 2+浓度对漆酶生产的影响'>3.3.8 Cu²⁺浓度对漆酶生产的影响
• 3.3.9 正交实验
• 3.4 本章小结
• 第四章 杏鲍菇漆酶的酶学性质研究
• 4.1 引言
• 4.2 材料和方法
• 4.2.1 材料
• 4.2.2 实验方法
• 4.3 结果和讨论
• 4.3.1 漆酶催化ABTS的UV光谱
• 4.3.2 温度对漆酶活力的影响
• 4.3.3 温度对漆酶稳定性的影响
• 4.3.4 pH对漆酶活力的影响
• 4.3.5 pH值对漆酶稳定性的影响
• 4.3.6 漆酶的动力学常数
• 4.3.7 金属离子对漆酶活力的影响
• 4.4 本章小结
• 第五章 漆酶催化氧化茶多酚反应条件的优化
• 5.1 引言
• 5.2 材料和方法
• 5.2.1 材料
• 5.2.2 方法
• 5.3 结果和讨论
• 5.3.1 温度对茶多酚氧化的影响
• 5.3.2 pH对茶多酚氧化的影响
• 5.3.3 酶用量对茶多酚氧化的影响
• 5.3.4 反应时间对茶多酚氧化的影响
• 5.3.5 底物浓度对茶多酚氧化的影响
• 5.3.6 利用漆酶的催化作用提高红茶品质的研究
• 5.4 本章小结
• 第六章 总结和展望
• 6.1 总结
• 6.2 展望
• 参考文献
• 致谢