尼可霉素提取工艺，HPLC定量分析方法及剂型初步研究

论文摘要

尼可霉素是一种生物农药，属于核苷肽类抗生素，通过抑制真菌细胞壁骨架成分之一几丁质的合成产生药效。尼可霉素目前通过微生物发酵手段生产，发酵工艺中对发酵液的提取有离子交换法和减压浓缩法，本文通过对后一种工艺中浓缩温度及发酵液pH两种因素的优化，使得率由32—35％提高到57-61％。尼可霉素的定量检测一般采用微生物检定法，效率和精密度均较低，而如果采用液相色谱法检测，尼可霉素的两种组分X，Z在常规反相色谱条件下又不易分离。本文采用离子对反相色谱，通过对流动相中有机系水系的比例，缓冲液pH，缓冲液浓度，离子对试剂的浓度等色谱条件的摸索，确定色谱条件为：流动相比例水／甲醇=94／6，缓冲液pH3.6，缓冲液浓度10 mM，离子对试剂浓度10 mM，流速1ml／min。在此条件下实现了X，Z组分色谱峰基线分离，建立了尼可霉素的离子对反相色谱的检测方法，加快了分析时间并提高检测精密度。回归方程为：Y=16627X+291874，r=0.9945，其中Y为峰面积，X为浓度（μg／mL）。该法在31.2—250ug／ml浓度范围内线性关系良好。精密度RSD=1.97％，平均回收率为97％，样品的日间稳定性良好，RSD=0.542％。本文还对尼可霉素的三种剂型的稳定性进行了研究，发现水剂的稳定性差，无法商品化。研究了可溶性粉剂和可溶性粒剂的载体及助剂对其稳定性的影响，筛选出合适的载体及助剂。可溶性粉剂的初步配方为（％）：原药30，载体J30，表面活性剂S2 8.49，GS1 8.49，光保护剂M 10，抗氧化剂（抗坏血酸）0.02，干燥剂5，防腐剂（NaCl）8，可溶性粒剂的初步配方为（％）：原药40，载体C2 30，表面活性剂GS3 30。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 1. 前言
• 1.1 尼可霉素简介
• 1.1.1 尼可霉素
• 1.1.1.1 尼可霉素
• 1.1.1.2 生物农药
• 1.1.2 国内外的研究现状
• 1.1.2.1 国外的研究现状
• 1.1.2.2 国内的研究现状
• 1.2 尼可霉素提取生产工艺
• 1.2.1 离子交换法
• 1.2.2 减压浓缩法
• 1.3 尼可霉素的定量分析
• 1.3.1 生物测定:管碟测定法
• 1.3.2 HPLC
• 1.3.2.1 离子对色谱（ion-pair chromatography, IPC）
• 1.3.2.2 离子对反相色谱方法的建立
• 1.3.2.3 方法学试验
• 1.4 制剂的贮存稳定性
• 1.4.1 剂型
• 1.4.1.1 剂型概述
• 1.4.1.2 生物农药的剂型加工
• 1.4.1.3 尼可霉素的剂型
• 1.4.2 制剂贮存稳定性
• 1.4.2.1 贮存稳定性
• 1.4.2.2 尼可霉素的不稳定性
• 1.4.3 提高活性成分的稳定性的几个途径
• 1.4.3.1 载体
• 1.4.3.2 表面活性剂
• 1.5 课题研究的内容，意义
• 1.5.1 研究的主要内容
• 1.5.2 课题研究的意义
• 2. 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 供试菌株
• 2.1.2 培养基
• 2.1.2.1 发酵培养基（%）
• 2.1.2.2 微生物检定培养基（%）
• 2.1.3 标准品
• 2.1.4 材料，试剂
• 2.1.5 主要仪器
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 提取工艺方法
• 2.2.1.1 离子交换法处理发酵液
• 2.2.1.2 减压浓缩法浓缩发酵液
• 2.2.1.3 减压浓缩法浓缩发酵液的放大实验
• 2.2.2 定量检测方法
• 2.2.2.1 生物测定（微生物检定）
• 2.2.2.2 HPLC分析方法的建立
• 2.2.3 制剂实验
• 2.2.3.1 热稳定性贮存实验
• 2.2.3.2 紫外保护剂性能对比实验
• 2.2.3.3 助剂及载体筛选试验
• 2.2.3.4 手工造粒
• 2.2.3.5 崩解时间测定
• 3. 结果与分析
• 3.1 提取工艺实验结果
• 3.1.1 离子交换法处理发酵液的收率
• 3.1.2 减压浓缩法处理发酵液的收率
• 3.1.3 减压浓缩法浓缩发酵液放大实验的收率
• 3.2 HPLC分析方法研究结果
• 3.2.1 HPLC分析方法的建立
• 3.2.1.1 流动相比例
• 3.2.1.2 缓冲液pH选择结果
• 3.2.1.3 缓冲液浓度选择结果
• 3.2.1.4 离子对试剂浓度确定
• 3.2.1.5 平衡时间确定
• 3.2.1.6 色谱图及光谱图
• 3.2.2 HPLC分析方法考核结果
• 3.2.2.1 标准曲线，线性范围
• 3.2.2.2 精密度试验
• 3.2.2.3 回收率试验
• 3.2.2.4 样品稳定性试验
• 3.3 制剂研究结果
• 3.3.1 水剂（AS）
• 3.3.2 可溶性粉剂（SP）
• 3.3.2.1 助剂单因子热贮筛选试验
• 3.3.2.2 载体筛选试验
• 3.3.2.3 表面活性剂筛选试验
• 3.3.2.4 绿色表面活性剂筛选试验
• 3.3.2.6 药害实验
• 3.3.3 可溶性粒剂（SG）
• 4. 讨论
• 参考文献
• 致谢