论文摘要
研究背景和目的：越来越多的证据表明,趋化因子及其受体与肿瘤的生长和转移相关。趋化因子受体CCR4在维持免疫平衡过程中发挥重要作用。最近的研究显示,CCR4在血液系统恶性肿瘤以及原发胃癌中都扮演一定的角色。但是,CCR4在乳腺癌中的作用还不清楚。本研究的目的是阐明趋化因子受体CCR4在乳腺中的表达情况,并且探索其在乳腺癌中的作用。方法：应用RT-PCR、western blot和流式细胞分析等方法检测不同人类乳腺癌细胞CCR4的表达水平。采用慢病毒包装的方法获得CCR4过表达慢病毒以及CCR4干扰慢病毒。分别感染CCR4表达水平较低的MDA-MB-231细胞系和CCR4表达水平较高的MDA-MB-231肺高转移潜能细胞株（MDA-MB-231 HM）,从而获得CCR4过表达的MDA-MB-231/CCR4细胞株以及CCR4下调的231HM/CCR4-RNAi细胞株。在体外实验中,采用流式细胞检测、CCK-8及细胞迁移实验等方法来观察CCR4基因修饰对乳腺癌细胞周期分布、增殖能力及对CCL17趋化反应能力的影响。在体内实验中,我们首先建立人乳腺癌裸鼠原位移植瘤模型,观察比较CCR4基因修饰对移植瘤生长曲线以及肺转移的影响；用免疫组化的方法标记移植瘤内新生血管（CD34）,计数MVD,比较CCR4基因修饰对移植瘤血管形成的影响；采用ELISA方法,比较移植瘤内CCL17和CCL22水平的变化。在人乳腺癌组织的研究中,随机选择复旦大学附属肿瘤医院2003年2月～2006年1月间的483例浸润性乳腺癌患者的组织标本,应用免疫组化的方法,分析CCR4的表达情况。采用Kaplan-Meier生存分析以及Cox比例风险回归分析CCR4的表达与患者无病生存率及总生存率的关系。结果：CCR4在不同的人类乳腺癌细胞中有不同水平的表达。并且,在肺高转移潜能的MDA-MB-231 HM细胞株和骨转移细胞株MDA-MB-231-B中,CCR4表达水平高于野生型MDA-MB-231。体外实验结果显示：CCR4基因过表达或下调后,细胞的周期分布、增殖能力没有改变。而乳腺癌细胞对CCL17的趋化反应是随着CCR4基因的上调而增加,随着CCR4基因下调而降低；而体内实验结果显示：1.CCR4过表达促进乳腺癌移植瘤生长而CCR4下调可以抑制乳腺癌移植瘤生长；2.CCR4过表达细胞所成移植瘤微血管密度增加而CCR4下调所成移植瘤微血管密度降低；3.移植瘤中的CCL22和CCL17水平与CCR4的表达水平正相关；4.CCR4过表达促进乳腺癌肺转移而CCR4下调抑制乳腺癌肺转移的形成。人乳腺癌组织中的研究结果显示,在483例乳腺癌患者中,有100例患者为CCR4阳性,阳性率为20.7%；CCR4的表达与HER2阳性、肿瘤局部复发、淋巴结转移、肺转移及骨转移相关联。CCR4阳性患者的总生存率和无病生存率较低；多因素分析结果显示,CCR4是浸润性乳腺癌患者总生存率的独立预后因素。结论：CCR4在人类乳腺癌细胞系中存在差异性表达；CCR4的表达可以促进乳腺癌肿瘤的生长和肺转移；CCR4状态是乳腺癌患者一个潜在的预后指标。