中国南海三种芋螺毒素的分离及鉴定

论文摘要

芋螺属腹足纲软体动物,全世界约有500～700种,遍布世界各暖海区,我国有芋螺100余种,主要分布在西沙群岛、海南岛及台湾海域。芋螺毒素由芋螺毒液管和毒囊内壁的毒腺所分泌,每种芋螺的毒液中含50～200个活性多肽,且每种芋螺的毒素序列极少重叠。芋螺毒素多数由10～40个氨基酸残基组成,富含二硫键,可作用于各种离子通道和受体的类型及亚型。它们不仅可以直接作为药物,还可作为理想的分子模板用于发展新药先导化合物,对神经生物学也具有重要意义。本论文旨在研究发现及鉴定新的芋螺毒素种类,从织锦芋螺,堂皇芋螺和大理石芋螺中分离、纯化、鉴定新的芋螺多肽,为进一步研究它们的生理及药理功能奠定基础。我们于2007年4月在我国南海地区采集了三种芋螺,进行芋螺毒素的分离、纯化和鉴定。在芋螺毒素的初分离阶段,采用G-25凝胶层析、离子交换、RP-HPLC相结合的纯化方式对三种芋螺中的芋螺毒素进行分离纯化,共获得了53种芋螺毒素,其中包括23种织锦芋螺毒素,25种堂皇芋螺毒素和5种大理石芋螺毒素。对分离纯化的芋螺毒素进行了HPLC分析,证实了获得的芋螺毒素的纯度均达到85%以上。在芋螺毒素的鉴定试验中,我们首先用基质辅助激光解析飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）方法确定其分子量,它们的分子量均在1000到4000之间。采用了Edman降解及四极杆-飞行时间串联质谱两种测序方法,对新发现的芋螺毒素进行了序列分析,共得到17个新的芋螺毒素序列,包括8个织锦芋螺毒素序列、8个堂皇芋螺毒素和1个大理石芋螺毒素序列,并对它们的序列特点及可能存在的生物活性进行了初步分析。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 0. 前言
• 1. 文献综述
• 1.1 芋螺毒素的发现和发展
• 1.2 织锦芋螺毒素研究进展
• 1.3 堂皇芋螺毒素研究进展
• 1.4 大理石芋螺毒素研究进展
• 1.5 多肽分离方法研究进展
• 1.6 多肽及二硫键分析方法进展
• 1.6.1 多肽分子量的测定
• 1.6.2 多肽序列分析
• 1.6.3 二硫键分析方法
• 1.7 本论文的研究目的及意义
• 2. 中国南海芋螺毒素的分离纯化
• 2.1 试验部分
• 2.1.1 主要仪器与试剂
• 2.1.2 织锦芋螺毒素的分离纯化
• 2.1.3 堂皇芋螺毒素的分离纯化
• 2.1.4 大理石芋螺毒素的分离纯化
• 2.2 结果与讨论
• 3. 中国南海芋螺毒素的鉴定
• 3.1 试验部分
• 3.1.1 主要仪器与试剂
• 3.1.2 织锦芋螺毒素的分子量测定
• 3.1.3 堂皇芋螺毒素的分子量测定
• 3.1.4 大理石芋螺毒素的分子量测定
• 3.1.5 Edman降解测序
• 3.1.6 芋螺毒素二硫键的还原及质谱测序
• 3.2 结果与讨论
• 3.3 本章小结
• 4. 结论与建议
• 4.1 结论
• 4.2 建议
• 参考文献
• 附录
• 缩略词表
• 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果
• 致谢