L1型金属β-内酰胺酶的分子生物学特征及酶学研究

论文摘要

目的:对临床分离的嗜麦芽窄食单胞菌所产L1型金属β-内酰胺酶基因进行序列分析,明确酶基因表型;构建表达载体与嗜麦芽窄食单胞菌L1编码基因的重组体,并在大肠埃希菌BL21（DE3）中原核表达。检测L1的等电点,并测定L1金属β-内酰胺酶对多种β-内酰胺类抗生素的稳定性,以及L1对多种β内酰胺类抗生素的酶动力学参数,温度及pH等因素对酶活性的影响。 方法: （1）参照文献,设计合成L1的PCR引物,以临床分离的嗜麦芽窄食单胞菌710的基因组作为模板,PCR扩增L1酶的编码基因。将L1的PCR产物与pUCm—T载体连接,测定L1的核苷酸序列。 （2）将L1酶基因克隆至表达载体pET-41a（+）,转化至宿主菌大肠埃希菌BL21（DE3）中。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测表达情况。 （3）提取重组菌的β内酰胺酶粗提液,等电聚集电泳测定L1的等电点（pI）并观察酶抑制剂和锌离子对酶活性的影响。 （4）以分光光度计测定及比较多种β内酰胺类抗生素对L1型金属β-内酰胺酶及超广谱β内酰胺酶的酶稳定性,并测定L1酶对多种β内酰胺类抗生素的动力学参数,以及温度及pH等因素对酶活性的影响。 结果: （1）序列分析结果显示目的基因片断长873 bp,经GenBank同源性比较,目的基因的氨基酸序列与金属酶L1型编码基因blaS(注册

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文件综述及研究课题的提出
• 1.1 概述
• 1.2 现代水砂胶结充填采矿技术的研究
• 1.2.1 低浓度水砂胶结充填的研究
• 1.2.2 全尾砂膏体胶结充填的研究
• 1.2.3 高水速凝水砂胶结充填的研究
• 1.2.4 全尾砂高浓度胶结充填
• 1.3 充填强度影响因素的研究现状及研究意义
• 1.3.1 骨料
• 1.3.2 胶凝剂
• 1.3.3 水
• 1.3.4 养护条件
• 1.4 胶结充填体与采场围岩相互作用的力学机理的研究
• 1.5 研究课题的提出
• 第二章 矿山概况
• 2.1 矿床地质特征及开采技术条件
• 2.1.1 地层
• 2.1.2 构造
• 2.1.3 开采技术条件
• 2.2 开拓方式
• 2.3 采矿工艺
• 2.4 上向水平分层江砂胶结充填采矿法
• 2.5 上向水平分层江砂胶结充填的评价
• 第三章 充填材料及配合比的试验研究及优化
• 3.1 充填材料选择及配合比优化的原则
• 3.2 充填材料的物理化学性质
• 3.3 影响强度的单因素试验研究
• 3.3.1 试验方案的确定
• 3.3.2 试验结果
• 3.3.3 试验结果分析
• 3.4 正交试验多元线性回归研究
• 3.4.1 多因素正交实验
• 3.4.2 影响强度的多因素正交试验
• 3.4.3 多元线性回归分析
• 3.4.4 正交试验的线性回归计算
• 3.4.5 多元线性回归方程的的意义
• 3.5 小结
• 第四章 水砂分层胶结充填采矿法及充填材料的优化
• 4.1 水砂分层胶结充填采矿法的优化
• 4.2 回采分层高度的确定
• 4.3 充填材料配比及成本优化
• 4.3.1 胶结充填体的所需强度设计
• 4.3.2 胶结充填体矿柱所需强度的设计
• 4.3.3 胶结面充填体所需强度的设计
• 4.4 充填材料及配合比的优化
• 4.4.1 矿柱充填成本的优化
• 4.4.2 矿房充填材料及配比的优化
• 4.5 优化后的生产工艺
• 4.5.1 采准切割
• 4.5.2 落矿工作
• 4.5.3 出矿
• 4.5.4 采场通风
• 4.5.5 采场支护与顶板管理
• 4.5.6 充填准备工作
• 4.6 小结
• 第五章 主要技术经济指标及分析
• 5.1 实际指标与分析
• 5.2 直接充填成本
• 5.3 采矿直接成本
• 第六章 主要结论与问题
• 6.1 主要结论
• 6.2 进一步研究的问题
• 致谢
• 参考文献
• 附录: 攻读硕士期间公开发表的论文目录