论文摘要
本研究以部颁抗癌中药艾迪注射液为研究对象，对其制剂工艺、药效学、质量标准和有关成分药动学进行了初步研究，内容如下：采用正交试验设计方法，对注射用艾迪（冻干）提取工艺进行优化。分别以斑蝥素、人参皂苷Rg1与Re总含量、异秦皮啶为考察指标，对提取溶剂用量、提取时间和提取次数3个因素进行优化，确定了注射用艾迪（冻干）中各组成药味的最佳提取工艺。采用D-101大孔树脂分离、超滤等方法对制剂进行精制，同时确定了真空冷冻干燥条件。结果表明，制成的冻干粉针呈浅黄色疏松状固体，含水量低，加水后能迅速溶解且分散均匀。采用MTT法，选取体外培养的人肝癌Bel-7402、人宫颈癌HeLa、人黑色素瘤A375-S2、人胃腺癌SGC-7901和小鼠纤维肉瘤L929细胞为模型，以半数抑制浓度(IC50)为指标，考察了注射用艾迪（冻干）对上述肿瘤细胞的生长抑制作用，结果表明，该制剂对上述肿瘤细胞有显著的增殖抑制作用，IC50分别为0.0162g·mL-1、0.0796g·mL-1、0.0982g·mL-1、0.0119g·mL-1和0.0144g·mL-1（生药量）。以小鼠移植性肿瘤肝癌H22、肉瘤S180和C57BL/6小鼠Lewis肺癌荷瘤小鼠为模型，抑瘤率为指标，考察了注射用艾迪（冻干）的体内抗肿瘤作用，结果表明，该制剂在三种不同剂量下对小鼠H22肝癌、S180肉瘤和C57BL/6小鼠Lewis肺癌均有抑制作用，并且抑制作用呈现明显的剂量依赖性。采用薄层色谱法分别对注射用艾迪（冻干）中的斑蝥素、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、黄芪甲苷和异秦皮啶进行定性鉴别，斑点清晰，重复性好，专属性强，可用于该制剂中各组成药味的鉴别。建立了该制剂的GC和HPLC指纹图谱质量评价方法。采用DB-1石英毛细管气相色谱柱（30m×0.25mm×0.25μm），以120℃保持5min，3℃·min-1升至250℃，再以2℃·min-1升至280℃保持30min为升温程序，以斑蝥素为参照物，建立了GC指纹图谱鉴别方法；采用Agilent Zorbax SB-C18液相色谱柱（250mm×4.6mm，5μm），以乙腈-0.05％磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，以紫丁香苷为参照物，建立了HPLC指纹图谱鉴别方法。结果表明该方法能有效控制该制剂与中间体的质量。采用GC-FID法测定了注射用艾迪（冻干）中斑蝥素含量。选用DB-1毛细管柱，柱温为145℃，载气为N2，斑蝥素在2.46～49.20μg·mL-1浓度范围内线性关系良好，平均回收率为100.3％（RSD=2.8％）；采用HPLC-UV法同时测定了人参皂苷Rg1和Re含量。选用Hypersil C18色谱柱，柱温为35℃，流动相为乙腈-0.05％磷酸溶液（19∶81），二者分别在20～200μg·mL-1（r=0.9997）和10～100μg’mL-1（r=0.9996）浓度范围内线性关系良好，平均回收率分别为98.2％（RSD=1.1％）和97.2％（RSD=1.2％）；采用HPLC-DAD法同时测定了刺五加药材中的原儿查酸、紫丁香苷B、绿原酸、咖啡酸、紫丁香苷E和异秦皮啶含量，选用Agilent Zorbax SB-C18色谱柱，柱温为35℃，以乙腈-0.05％磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，各组分线性关系良好，平均回收率为90.3～94.3％，RSD＜2.4％。采用相同色谱条件，同时测定了制剂中毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷、紫丁香苷B、绿原酸、咖啡酸、紫丁香苷E和异秦皮啶的含量，各组分线性关系良好，平均回收率为96.6～98.2％，RSD＜2.3％。所建立的含量测定方法为有效控制该制剂质量提供了定量依据。建立了测定大鼠血浆中异秦皮啶含量的HPLC-UV分析方法，以香豆素为内标，乙酸乙酯为提取溶剂，异秦皮啶在0.05～8.0μg·mL-1范围内线性关系良好。方法的定量下限0.05μg·mL-1，日内精密度RSD≤6.4％，日间精密度RSD≤7.9％，准确度RE为±5.1％，平均回收率为85.4％。测定了异秦皮啶的血药浓度-时间曲线，并计算了相应的药物动力学参数，t1/2为4.26h，Cmax为5.47μg·mL-1，tmax为0.24h。建立了同时测定大鼠血浆中紫丁香苷B和绿原酸含量的HPLC-DAD分析方法，以栀子苷为内标，血浆经甲醇沉淀蛋白后，采用选择波长法进行分析。紫丁香苷B和绿原酸分别在0.20～10μg·mL-1和0.25～30μg·mL-1范围内线性关系良好。定量下限分别为0.20μg·mL-1和0.25μg·mL-1，日内精密度分别为RSD≤8.5％和RSD≤6.1％，日间精密度分别为RSD≤7.1％和RSD≤5.5％，准确度RE分别为±4.1％和±8.6％，平均回收率分别为92.1％和80.9％。静脉给予注射用艾迪（冻干）后，大鼠血浆中紫丁香苷B消除较快，t1/2为0.49h；绿原酸的t1/2为0.82h。建立了测定大鼠血浆中毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷含量的HPLC-UV分析方法，以香兰素为内标，乙酸乙酯为提取溶剂，毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷在0.11～17.6μg·mL-1范围内线性关系良好。方法的定量下限为0.11μg·mL-1，日内精密度RSD≤6.3％，日间精密度RSD≤6.2％，准确度RE为±6.7％，平均回收率为87.2％。测定了毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷的血药浓度-时间曲线，并计算了相应的药物动力学参数，t1/2为0.70h，AUC0-t、AUC0-∞分别为1.38μg·h·mL-1和1.64μg·h·mL-1。