论文题目: 东亚钳蝎抗神经兴奋肽Ⅱ的表达条件优化及纯化条件研究
论文类型: 硕士论文
论文专业: 微生物与生化药学
作者: 周宁
导师: 张景海
关键词: 东亚钳蝎毒,抗神经兴奋肽,蛋白表达,纯化
文献来源: 沈阳药科大学
发表年度: 2005
论文摘要: 蝎毒中含有许多具有独特生物学活性的成分，东亚钳蝎抗神经兴奋肽Ⅱ是其中一种。将质粒pNJUTRXA-ANEPⅡ转化大肠杆菌BL21(DE3)，通过IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)诱导可溶性的表达出目标蛋白ANEPⅡ。为了提高东亚钳蝎抗神经兴奋肽肽在大肠杆菌中的表达量，通过正交设计实验研究了重组菌的发酵条件，包括接种量、培养时问、诱导时间、诱导剂IPTG使用浓度等对表达的影响。并用SDS聚丙稀酰胺凝胶电泳进行定性分析。 根据目标蛋白含有的组氨酸标记可以和金属离子特异性结合的原理，采用不同的镍离子螯合层析的方案，将目标蛋白初步纯化。同时进行比较，选出最佳的镍柱纯化条件。 本文同时还进行了重组质粒pNJUTRXA-ANEPⅡ的稳定性研究。构建的重组质粒载体pNJUTRXA-ANEPⅡ转化大肠杆菌BL21(DE3)，涂布于LB-AP平板，挑取单菌落，在不同的转接次数测其质粒的突变率为0.002％、0.012％、0.016％；质粒的丢失率为1.2％、46％、73％。
论文目录:
中文摘要
英文摘要
第一部分 前言
第二部分 ANEPII表达条件优化
一、实验材料
二、实验仪器
三、实验操作与方法
1.质粒的小量制备
2.质粒的转化
3.PNJU-ANEPII-C_1-Ile-Glu-(His)_6的诱导表达
4.低分子量SDS-PAGE
四、结果与讨论
1.实验结果
2.讨论
五、结论
第三部分 ANEPII表达蛋白的纯化
一、实验材料
二、实验仪器
三、实验操作与方法
1.目标蛋白的诱导表达
2.蛋白质的粗提
3.金属离子螯合柱的处理
4.样品的纯化
5.Folin-酚法测蛋白含量
四、结果与讨论
1.实验结果
2.讨论
五、结论
第四部分 重组质粒在大肠杆菌中稳定性的研究
一、实验材料
二、实验仪器
三、实验操作与方法
1.基因工程菌的代时测定
2.质粒突变率的考察
3.质粒丢失率的考察
四、结果与讨论
1.实验结果
2.讨论
五、结论
参考文献
致谢
发布时间: 2006-11-27
参考文献
- [1].转基因烟草表达东亚钳蝎抗神经兴奋肽Ⅱ[D]. 盛钰.沈阳药科大学2006
- [2].东亚钳蝎抗神经兴奋肽表达、纯化及部分性质[D]. 惠长野.沈阳药科大学2005
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