穿心莲二萜内酯类化合物跨膜转运机制研究

论文摘要

目的：通过采用Caco-2细胞模型对穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯和新穿心莲内酯在体外的吸收特征进行系统研究,为深入探讨穿心莲二萜内酯类化合物的药代动力学特征及其药理学作用机制提供试验和理论依据。方法：①采用摇瓶法测定穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯和新穿心莲内酯在正辛醇-水和王辛醇-缓冲液体系中的表观油水分配系数。②建立液相色谱串联质谱检测方法,测定Caco-2细胞外穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯和新穿心莲内酯的浓度；建立及全面评价Caco-2单层细胞特性；用Caco-2细胞模型研究穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯和新穿心莲内酯的双向转运：考察时间、浓度、体系温度、抑制剂对三者跨膜转运的影响,探究其在Caco-2细胞转运试验中的吸收机制和外排现象。③研究了穿心莲内酯和新穿心莲内酯不同配比条件下在Caco-2细胞模型中的转运情况。固定穿心莲内酯浓度,改变新穿心莲内酯的剂量,观察新穿心莲内酯对穿心莲内酯转运的影响。结果：①37℃下穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯和新穿心莲内酯的表观油水分配系数分别为3.90（log Papp=0.29）、19.75（log Papp=1.30）和1.75（log Papp=0.24）,穿心莲内酯和新穿心莲内酯在pH6磷酸盐缓冲液时表观油水分配系数最大,而脱水穿心莲内酯则在pH5磷酸盐缓冲液时最大。②Transwell板上培养21天后的Caco-2细胞单层结构紧密、TEER值>500Ω·cm2、碱性磷酸酶已经大部分集中于刷状缘一侧（AP侧）、模型通透性较好。③穿心莲内酯在Caco-2细胞模型中,随时间和浓度的增加,药物吸收呈饱和趋势,且受温度和碘乙酰胺影响,但不受外排抑制剂维拉帕米和MK-571的影响。④脱水穿心莲内酯在Caco-2细胞模型中,随着浓度的增加和时间的延长,转运量呈线性增加,不受温度、维拉帕米和MK-571的影响。⑤新穿心莲内酯在Caco-2细胞模型中,存在浓度和时间依赖性,而温度和碘乙酰胺显著的影响转运结果,不受维拉帕米和MK-571的影响。⑥穿心莲内酯和新穿心莲内酯结合给药,随着新穿心莲内酯浓度的增加,穿心莲内酯从肠腔侧（AP）到基底侧（BL）的转运量减少。结论：①pH对穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯和新穿心莲内酯的表观油水分配系数有一定影响。在一定范围内,pH值增加可使穿心莲二萜内酯类成分的表观油水分配系数减小。②本研究建立的完整Caco-2细胞单层模型符合药物转运试验的要求。③穿心莲内酯在Caco-2细胞中的吸收主要是由载体介导的主动转运,且该主动转运的载体可能位于AP侧。④脱水穿心莲内酯主要以被动扩散为主要方式经由Caco-2细胞单层吸收和转运。⑤新穿心莲内酯在Caco-2细胞中的吸收转运主要由被动转运和主动转运共同参与,主要转运的载体可能位于AP侧。⑥穿心莲内酯的吸收转运可被新穿心莲内酯竞争性抑制,二者的吸收转运可能由同-转运载体介导。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 引言
• 1 穿心莲二萜内酯类成分的药代动力学研究
• 1.1 穿心莲二萜内酯类的药动学研究
• 1.2 穿心莲二萜内酯类的体内代谢研究
• 2 药物的肠道转运机制和吸收方法研究进展
• 2.1 肠上皮微观结构及药物转运途径
• 2.2 研究药物肠吸收的实验方法和进展
• 第二章 穿心莲二萜内酯类化合物的表观油水分配系数研究
• 1 材料
• 1.1 主要试剂与药品
• 1.2 主要仪器
• 2 方法
• 2.1 色谱条件
• 2.2 供试品溶液的制备
• 3 结果
• 3.1 标准曲线的制备
• 3.2 精密度实验
• 3.3 表观油水分配系数测定
• 4 讨论
• 5 小结
• 第三章 Caco-2细胞单层模型的建立与评价
• 1 材料
• 1.1 细胞株
• 1.2 主要试剂与药品
• 1.3 主要仪器
• 2 方法
• 2.1 细胞培养
• 2.2 细胞完整性考察
• 3 结果
• 3.1 细胞形态学观察
• 3.2 跨上皮细胞电阻（TEER）的检测
• 3.3 碱性磷酸酶活性的测定
• 3.5 普萘洛尔通透性的测定
• 4 讨论
• 5 小结
• 第四章 Caco-2细胞对穿心莲二萜内酯类化合物跨膜转运的研究
• 1 材料
• 1.1 细胞株
• 1.2 主要试剂及药品
• 1.3 主要仪器
• 2 方法
• 2.1 溶液的配制
• 2.2 生物样本中穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯和新穿心莲内酯浓度测定方法的建立
• 2.3 MTT法检测穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯和新穿心莲内酯对Caco-2细胞的增殖抑制作用
• 2.4 Caco-2细胞转运实验
• 3 结果
• 3.1 LC/MS/MS方法学评价
• 3.2 穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯和新穿心莲内酯对Caco-2细胞的抑制作用
• 3.3 Caco-2细胞的转运实验
• 4 讨论
• 5 小结
• 第五章 穿心莲内酯和新穿心莲内酯在Caco-2细胞中的相互作用
• 1 材料
• 2 方法
• 2.1 药物配制
• 3 结果
• 4 讨论
• 5 小结
• 第六章 结论与展望
• 1 结论
• 1.1 穿心莲二萜内酯类化合物的表观油水分配系数
• 1.2 Caco-2细胞单层模型的建立和评价
• 1.3 穿心莲二萜内酯类化合物在Caco-2细胞单层模型上的跨膜转运
• 1.4 穿心莲内酯和新穿心莲内酯在Caco-2细胞单层模型中的相互作用
• 2 展望
• 参考文献
• 附录
• 致谢