甘肃黄芪黄酮类化合物对血管内皮细胞的保护作用

论文摘要

目的：观察甘肃黄芪黄酮单体毛蕊异黄酮（calycosin），2’-OH-3’，4’-二甲氧基异黄烷-7-O-β-D-吡喃葡萄糖（2’-OH-3’，4’-dimethoxyisoflavanone-7-O-β-D-glucopyranoside）对血管内皮细胞的保护作用（抗凋亡，内分泌功能及RAS系统成员ACE/ACE2的表达）。方法：体外传代培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs），建立内皮细胞损伤模型，分为对照组，血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）组(1×10-6mol·L-1)，AngⅡ+2’-OH-3’，4’-二甲氧基异黄烷-7-O-β-D-吡喃葡萄糖组(1μg·mL-1)，AngⅡ+毛蕊异黄酮不同浓度组(10，1，0.1μg·mL-1)，各组细胞培养24h后，采用荧光显微镜和激光共聚焦显微镜技术（LSCM）观察细胞的形态，流式细胞仪技术（FCM）探讨HUVECs凋亡形态、凋亡率及凋亡基因Fas的表达情况；采用放射免疫分析技术和硝酸还原酶法测细胞培养上清液中ET，NO；采用免疫组化和逆转录集合酶链反应（RT-PCR）技术检测细胞中ACE/ACE2表达的变化。结果：与正常对照组比较，AngⅡ组可促进HUVECs凋亡（70.23±4.59vs12.48±2.50，P=0.000），Fas蛋白表达增加（96.43±1.23 vs 17.41±1.52，P=0.000），激光共聚焦显微镜技术观察到了典型的凋亡细胞；毛蕊异黄酮(1μg·mL-1)及2’-OH-3’，4’-二甲氧基异黄烷-7-O-β-D-吡喃葡萄糖(1μg·mL-1)可抑制AngⅡ的促HUVECs凋亡作用（分别为：55.99±2.40 vs 70.23±4.59，P=0.001；58.31±2.64 vs70.23±4.59，P=0.002），并减少了Fas的表达（分别为：73.73±2.15 vs 96.43±1.23，P=0.000；76.63±1.67 vs 96.43±1.23，P=0.000）；同时毛蕊异黄酮(1μg·mL-1)与2’-OH-3’,4’-二甲氧基异黄烷-7-O-β-D-吡喃葡萄糖(1μg·mL-1)抑制AngⅡ的促ET-1分泌（分别为：34.96±1.27 vs 60.28±0.93，P=0.000；32.17±8.24 vs 60.28±0.93，P=0.036），并促进了HUVECs NO的释放（分别为：43.28±4.92 vs 27.96±5.04，P=0.011；42.74±7.21 vs 27.96±5.04，P=0.014）；与正常对照组比较，AngⅡ可促进ACE蛋白（133.44±2.43 vs 113.70±3.63，P=0.000），mRNA的表达（0.83±0.03 vs 1.32±0.02，P=0.000），减弱ACE2表达（分别为：94.36±7.88 vs127.47±5.23，P=0.002；0.78±0.04 vs 1.04±0.02，P=0.002）；毛蕊异黄酮可增强ACE2表达（低、中、高剂量组分别为，蛋白：114.77±4.43 vs 94.36±7.88，P=0.030；127.04±2.38 vs 94.36±7.88，P=0.006；152.01±4.10 vs 94.36±7.88，P=0.001；mRNA：1.02±0.01 vs 0.78±0.04，P=0.000；1.14±0.03 vs 0.78±0.04，P=0.000；1.27±0.02 vs0.78±0.04，P=0.000），抑制ACE分泌（低、中、高剂量组分别为，蛋白：119.45±2.54vs 133.44±2.43，P=0.001；108.48±5.05 vs 133.44±2.43，P=0.000；95.23±5.34 vs133.44±2.43，P=0.000；mRNA：1.21±0.01 vs 1.32±0.02，P=0.035；1.10±0.01 vs1.32±0.02，P=0.005；1.21±0.01 vs 1.01±0.01，P=0.000），并呈剂量依赖性；两种黄芪黄酮单体相同浓度的组间比较，在实验所测各项指标均无统计学差异（两组间细胞凋亡率、Fas表达、ET-1及NO的含量分别为55.99±2.40 vs 58.31±2.64，P=0.396；73.73±2.15 vs 76.63±1.67，P=1.000；34.96±1.27 vs 32.17±8.24，P=0.383；43.28±4.92 vs 42.74±7.21，P=1.000）。结论：甘肃黄芪黄酮类化合物通过抑制AngⅡ所致的体外培养HUVECs的凋亡，减少ET-1分泌，促进NO释放，增强内皮细胞中ACE2表达，抑制ACE的分泌，从而减轻AngⅡ对HUVECs的损伤，发挥了保护内皮细胞的作用。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 1.血管内皮细胞凋亡与心血管疾病
• 2.血管内皮细胞分泌功能与心血管疾病
• 3.肾素-血管紧张素系统与心血管疾病
• 4.黄芪及其有效成分的作用
• 研究背景
• 材料与方法
• 1. 仪器与试剂
• 2. 实验方法与步骤
• 3. 统计分析
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 攻读学位期间发表的学术论文
• 致谢
• 附录