人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因启动子的克隆及其在喉癌基因治疗中的意义

论文摘要

目的:1、克隆人端粒酶催化亚基（human telomerase reverse transcriptase, hTERT）基因的核心启动子,并构建hTERT基因核心启动子调控的荧光素酶报告载体,检测其在肿瘤细胞和正常细胞中表达的差异。2、将HSV-tk基因定向插入到hTERT基因核心启动子下游,检测HSV-tk基因是否在肿瘤细胞中特异性表达。 方法:提取人HeLa细胞的基因组,利用PCR技术克隆hTERT基因的核心启动子。将其插入荧光素酶报告载体中,经限制性内切酶Sac Ⅰ、Hind Ⅲ酶切和PCR鉴定后,转染肿瘤细胞及正常细胞,观察两种细胞中荧光素酶基因表达的差异。以含有HSV-tk基因cDNA全长的质粒pBluescript-tk为模板扩增出tk基因,在tk基因两端加入Xba Ⅰ和Nco Ⅰ酶切位点。用限制性内切酶Xba Ⅰ和Nco Ⅰ将hTERT核心启动子调控的荧光素酶载体中的荧光素酶切除,将tk基因连接于hTERT核心启动子的下游。转染喉癌细胞系Hep-2和正常肝细胞系7702,利用RT-PCR检测tk基因的表达。 结果:hTERT基因的启动子调控的表达载体在肿瘤细胞中呈高效表

论文目录

• 缩略语表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 文献回顾
• 正文
• 1 实验设计
• 1.1 研究意义
• 1.2 研究目的
• 1.3 研究方法
• 1.4 研究任务
• 2 实验研究
• 2.1 人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因启动子的克隆及其活性鉴定
• 2.1.1 主要仪器
• 2.1.2 材料
• 2.1.3 主要试剂
• 2.1.4 方法
• 2.1.5 结果
• 2.1.6 讨论
• 2.2 hTERT基因启动子调控HSV-tk基因表达的检测
• 2.2.1 主要仪器
• 2.2.2 材料
• 2.2.3 主要试剂
• 2.2.4 方法
• 2.2.5 结果
• 2.2.6 讨论
• 2.3 小结
• 参考文献
• 个人简历和研究成果
• 致谢