发根农杆菌Ri质粒转化甘草的研究

论文摘要

甘草（Glycyrrihizag）属于豆科（Leguminosae）甘草属（Glycyrrhiza）灌木状多年生草本植物,以根和茎入药,是最常见的药用作物之一。在《神农本草经》中亦列为上品,具有补脾益气、清热解毒、润肺止咳、缓急止痛、调和诸药等之功效。甘草多年来一直是国内外研究的热点。除药用价值外,甘草在食品、饮料、卷烟、化妆品等工业中有着重要的作用,需求的日益增加仅依靠从野生药用植物中提取有用的次生代谢产物势必导致大量消耗野生药用植物资源,甚至导致物种灭绝。人工栽培,周期长,部分药用成分含量降低。而采用组织培养技术可以控制植物生长环境,加快其繁殖速度,并可以从细胞培养物直接提取有效成分。为了更深入的了解甘草及保护其野生资源,本研究进行了以下方面的工作:以乌拉尔甘草为材料,用发根农杆菌转化甘草,并诱导发状根愈伤组织,探讨了激素等对愈伤组织的影响,为植株再生和从培养物中直接提取有效成分奠定基础。其研究结果如下:1本实验利用发根农杆菌成功诱导出了甘草发状根,A4对子叶诱导率最高,预培养时间为2天,共培养时间为4天最佳,除菌浓度Cef（300mg/L）。2 MS为甘草发状根最佳培养基,最佳培养条件:交替光照,23℃,暗培养30天为一周期3发状根细胞生长曲线为近“S”型,对数生长期在10-20天,蔗糖消耗量在对数生长期最大,NH4+的消耗主要在对数生长期前后,25天以后趋于稳定。由此断定,在接种后25-30天是收获甘草细胞适宜时期。4检测了不同愈伤组织的可溶性多糖、可溶性淀粉含量及多酚氧化酶、过氧化物酶的活力。绿色甘草发状根愈伤组织的可溶性多糖、可溶性淀粉含量及多酚氧化酶、过氧化物酶活性最高。5检测了不同愈伤组织的内源激素（ABA、IAA）水平,甘草发状根愈伤组织培养中,绿色发状根愈伤组织中多糖含量较高并表现较高的淀粉活性,内源IAA在绿色发状根愈伤组织有积累高峰,而ABA在绿色发状根愈伤组织水平较低。这些变化表明绿色甘草发状根愈伤与胚性愈伤组织有密切的关系。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 前言
• 1.1 甘草研究概况
• 1.2 植物细胞工程技术在药用植物中的应用
• 1.3 发根农杆菌Ri质粒应用于药用植物的研究
• 1.4 发状根产生次生代谢物质研究进展
• 1.5 甘草组织培养研究进展
• 1.6 研究的目的与意义
• 第二章 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.2 试剂
• 2.3 主要设备与仪器
• 2.4 实验方法
• 2.5 蕙酮法测定可溶性糖含量
• 2.6 淀粉含量的测定
• 2.7 过氧化物酶活性测定
• 2.8 多酚氧化酶活性测定
• 2.9 内源激素的ELISA测定
• 第三章 结果与分析
• 3.1 发状根培养体系的建立
• 3.2 发状根生长曲线的测定
• 3.3 不同生长调节物质对甘草发状根愈伤组织诱导的影响
• 3.4 培养基中残存蔗糖的含量
• 3.5 培养基中NH4‘的含量测定
• 3.6 甘草发状根生理生化特性研究
• 第四章 结论与讨论
• 参考文献
• 附图
• 致谢
• 个人简历