马钱子的炮制工艺及HPLC指纹图谱的研究

论文摘要

马钱子具有重要的中药临床应用价值,但其毒性剧烈,中毒量与治疗量接近,若因误用,或服用过量,或炮制不得法,可引起中毒反应甚则死亡。尤其在剂量方面,许多有关马钱子毒性反应的报道均由于服用马钱子剂量过大引起。但临床应用时若剂量太小又达不到较好的疗效。现代医药学者对马钱子的化学成分,药理作用方面的研究已达到很高水准,但对其量效关系的研究目前仍很少,毒理学方面的研究也不够深入。因此,以中医药理论为基础,结合现代实验研究手段,系统探讨马钱子用药剂量的差异与临床效用的关系及马钱子毒性方面的问题有着较为广阔的前景。祖国医药学研究表明,马钱子味苦,性温,有大毒,归肝,脾经。主要功能为通络止痛,散结消肿。用于治疗风湿顽痹,麻木瘫痪,跌扑损伤,痈疽肿痛等。现代医药学文献研究表明,马钱子含多种生物碱,药理作用广泛,可用于治疗内科、外科、五官科等疾病。马钱子的主要有毒成分为番木鳖碱和马钱子碱。若服用过量,可引起肢体颤动、惊厥、呼吸困难、昏迷。影响马钱子毒性的因素很多,主要有剂量、炮制、配伍、剂型等方面。本论文用HPLC法对马钱子的江西炮制方法及其改良法炮制品中士的宁和马钱子碱含量进行测定。色谱柱填料为硅胶,流动相为正己烷一二氯甲烷一甲醇一浓氨溶液（47.5∶47.5∶5∶0.35）,检测波长为254nm。江西法炮制品中士的宁和马钱子碱的含量较低。该法精确、简便、重现性好。以马钱子为研究对象,采用HPLC法进行色谱指纹图谱研究。建立了马钱子药材HPLC指纹图谱。以甲醇-水-浓盐酸（50∶50∶1）为提取溶剂,超声波震荡30min,制备马钱子药材样品溶液;采用RP-HPLC（DAD）法,选用Kromasil KR100-5C18色谱柱,流速1ml/min,检测波长254nm,流动相为乙腈（B）-0.2%三乙胺-0.2%乙酸溶液（A）,梯度洗脱（v/v）:0min时8%∶92%,30min时17%∶83%,60min时60%∶40%,对10批马钱子药材进行测定,以士的宁为参照物,标定了具有代表性的12个峰作为共有峰;通过方法学验证,精密度、稳定性、重现性试验RSD均小于3%;采用相似度作为指纹图谱的评判参数,计算了不同批次与对照指纹图谱之间的相似度均大于0.9,表明10批药材质量均一、稳定。该研究方法为马钱子药材的质量控制提供了参考。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 前言
• 1 文献综述
• 1.1 祖国医药学对马钱子的认识
• 1.1.1 来源及命名
• 1.1.2 采集与鉴别
• 1.1.3 炮制
• 1.1.4 性味归经
• 1.1.5 功能与主治
• 1.1.6 应用与配伍
• 1.1.7 用量用法及使用注意
• 1.2 现代医药学对马钱子的研究概况
• 1.2.1 化学成分
• 1.2.2 药理作用
• 1.2.3 临床研究
• 1.2.4 毒理学研究
• 1.2.4.1 毒性及中毒机理
• 1.2.4.2 中毒表现及救治
• 1.2.4.3 影响马钱子毒性反应的因素
• 1.3 讨论
• 1.3.1 对马钱子的认识
• 1.3.2 马钱子的药理、应用研究现状
• 1.3.3 关于马钱子剂量与疗效关系的讨论
• 1.3.4 关于马钱子毒性安全方面的讨论
• 1.3.5 关于马钱子炮制的讨论
• 2 马钱子炮制工艺研究
• 2.1 关于马钱子炮制原理研究
• 2.2 炮制方法
• 2.3 炮制去毛与否研究
• 2.4 马钱子不宜生用或非专业人员炮制的原因
• 3 马钱子含量的研究现状
• 4 本论文研究意义
• 参考文献
• 第二章 HPLC测定马钱子及其炮制品中士的宁和马钱子碱的含量
• 1 马钱子江西炮制方法
• 1.1 仪器与试药
• 1.2 样品炮制
• 1.21 马钱子
• 1.22 砂烫法
• 1.23 油炸法
• 1.24 樟帮尿泡法
• 1.25 樟帮尿泡滑石粉炒法
• 1.26 建帮尿泡砂炒法
• 1.27 醋酸浸法
• 1.28 醋酸浸泡砂炒法
• 1.29 醋酸煮法
• 1.30 醋酸煮砂炒法
• 2 检测的实验方法和结果
• 2.1 色谱条件
• 2.2 标准曲线的绘制
• 2.3 精密度试验
• 2.4 重现性试验
• 2.5 稳定性试验
• 2.6 回收率试验
• 2.7 含量测定
• 3.讨论
• 参考文献
• 第三章 马钱子HPLC指纹图谱的研究
• 3.1 仪器、试剂和样品
• 3.1.1 仪器
• 3.1.2 试剂
• 3.1.3 药材和对照品
• 3.1.4 对照品
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 对照品溶液的制备
• 3.2.2 供试品溶液制备方法的选择
• 3.2.3 色谱条件的选择
• 3.2.3.1 流动相的选择
• 3.2.3.2 流速的选择
• 3.2.3.3 检测波长的选择
• 3.2.3.4 色谱柱的选择
• 3.2.4 共有峰的确定
• 3.2.5 方法学验证
• 3.2.5.1 精密度试验
• 3.2.5.2 稳定性试验
• 3.2.5.3 重现性实验
• 3.2.6 马钱子碱和士的宁含量测定
• 3.2.7 马钱子药材指纹图谱的相似度评价
• 3.3 结果与讨论
• 3.3.1 色谱条件的确定
• 3.3.1.1 等度洗脱
• 3.3.1.2 流速对色谱图的影响
• 3.3.1.3 供试品溶液制备方法的确定
• 3.3.1.4 梯度洗脱条件的确定
• 3.3.1.5 检测波长的选择
• 3.3.1.6 色谱柱的选择
• 3.3.2 共有峰的标定
• 3.3.3 方法学验证
• 3.3.3.1 精密度试验
• 3.3.3.2 稳定性试验
• 3.3.3.3 重现性试验
• 3.3.4 样品的含量测定
• 3.3.4.1 士的宁的含量测定
• 3.3.4.2 马钱子碱的含量测定
• 3.3.5 马钱子药材指纹图谱的相似度评价
• 3.4 小结
• 硕士期间发表和待发表的学术论文
• 致谢