广西猪链球菌2型流行病学研究

论文摘要

猪链球菌2型是人畜共患传染性病原,为了解猪链球菌2型在广西的分布及流行规律,本研究建立了猪链球菌2型三重PCR检测方法进行流行病学调查。该法利用链球菌属（Streptococcus）、猪链球菌亚种（S.suis）以及猪链球菌2型（SS2）的保守核苷酸序列分别设计了3对引物用于PCR检测,确保了检测的高度特异性,试验表明,所建立的三重PCR检测方法敏感性高,可以检测到20CFU/ml的链球菌。本研究对广西14个市中的13个市29个县区（5个为曾发生人感染猪链球菌病县区）的健康猪扁桃体和病死猪脏器（肝、脾、肺或淋巴结）进行了猪链球菌2型的流行病学调查。样品接种绵羊血平板（添加了25ug/L的萘啶酮酸和15ug/L的多粘菌素）和葡萄糖肉浸液肉汤（添加了10%马血清）分离细菌及增菌。通过建立的三重PCR方法,从健康猪和病死猪样品中检测出链球菌分别为85.9%（4081/4752）、86.1%（368/427）,猪链球菌分别为52.8%（2507/4752）、44.5%（190/427）,猪链球菌2型分别为2.7%（127/4752）、2.6%（11/427）,结果表明广西猪群链球菌带菌率高,猪链球菌2型带菌率低;来自曾发生人感染猪链球菌病县区和未曾发生人感染猪链球菌病县区的健康猪扁桃体猪链球菌2型的分离率差异不显著（P＞0.05）,分别是3.2%（45/1401）和2.4%（82/3351）;夏季和冬季采集的健康猪扁桃体猪链球菌2型的分离率差异也不显著（P＞0.05）,分别为2.9%（111/3877）和1.8%（16/875）。本研究对分离到的部分猪链球菌2型菌株（64株,其中分离自健康猪56株,分离自病死猪8株）进行了进一步的毒力基因核苷酸序列分析（CPS基因的CPS2J片段）,结果显示64株广西猪链球菌2型菌的CPS2J核苷酸和氨基酸的同源性高,分别为在98.7%-100%和97.0%以上;广西株与江苏人源菌株98015和四川猪源菌株SC01的同源性很高,核苷酸同源性在99.1%-100%之间,氨基酸同源性在97.9%以上。系统树的分析表明,64株广西猪链球菌2型菌株可以分为两大群,即Ⅰ群和Ⅱ群,Ⅰ群包括8株分离自病死猪的猪链球菌2型菌株和大部分分离自健康猪的菌株,Ⅰ群又分为Ⅰa和Ⅰb 2个亚群,Ⅰb亚群只有GXGL547株和GXYL22株,它们的CPS2J碱基因在401位由A变为C,形成了CAATTG MunⅠ的酶切位点,其余的属于Ⅰa亚群;Ⅱ群中有10株,全部分离自健康猪,所有Ⅱ群菌株CPS2J在496位点出现了相同的变异,碱基由A变为了G。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 目录
• 第一章 研究综述
• 1.1 病原
• 1.1.1 病原及其培养特性、生化特性
• 1.1.2 病原分类
• 1.2 流行情况
• 1.3 毒力因子
• 1.3.1 荚膜多糖
• 1.3.2 诊断性抗原—谷氨酸脱氢酶蛋白
• 1.4 猪链球菌病诊断与病原鉴定
• 1.4.1 细菌分离培养鉴定
• 1.4.2 血清学鉴定
• 1.4.3 分子生物学方法
• 1.5 研究目的、意义
• 第二章 试验内容
• 2.1 材料
• 2.1.1 主要试剂及配制
• 2.1.2 参考菌株
• 2.1.3 检测样品
• 2.1.4 引物序列
• 2.1.5 主要仪器
• 2.1.6 技术路线
• 2.2 方法
• 2.2.1 猪链球菌2型三重PCR方法的建立及样品带菌率调查
• 2.2.2 猪链球菌2型Cps2J基因的扩增、克隆测序和序列分析
• 2.3 试验结果
• 2.3.1 猪链球菌2型三重PCR方法的建立及样品带菌率调查结果
• 2.3.2 猪链球菌2型CPS2J基因的扩增、克隆测序和序列分析结果
• 2.4 讨论
• 2.4.1 猪链球菌2型三重PCR方法的建立
• 2.4.2 猪链球菌2型带菌率调查
• 2.4.3 猪链球菌2型CPS2J基因克隆、测序、分析
• 结论
• 参考文献
• 附录1:CPS2J核苷酸序列比对
• 附录2:CPS2J氨基酸序列分析
• 附录3:CPS2J核苷酸序列的同源性分析
• 附录4:CPS2J氨基酸序列的同源性分析
• 致谢
• 攻读硕士期间发表的论文