论文题目: 复叶槭组织培养再生体系建立及其遗传转化初步研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 园林植物与观赏园艺
作者: 张彦妮
导师: 卓丽环
关键词: 复叶槭,组织培养,愈伤组织,遗传转化
文献来源: 东北林业大学
发表年度: 2005
论文摘要: 本研究通过不定芽和愈伤组织两种途径,首次建立了复叶槭的组织培养再生体系,并采用农杆菌介导法和针刺法首次对槭树科植物进行了抗虫基因的遗传转化,得到了经PCR和PCR-Sourthern检测呈阳性的转基因愈伤组织和转基因植株。本论文研究的主要内容和结果如下: 1.复叶槭不定芽途径再生体系的建立 (1) 以茎节、顶芽为外植体,通过比较不同激素种类和浓度对增殖率和分化率的影响,筛选出适合不同外植体的最佳培养基和激素组合,从而建立起复叶槭不定芽再生体系。结果表明,适合茎节和顶芽的增殖培养基均是MS基本培养基附加0.1mg/L 6-BA和0.01mg/L NAA,分化培养基分别是附加0.1 mg/L TDZ和0.01 mg/L 2,4-D的MS培养基和附加0.01 mg/L TDZ的MS培养基,最佳的生根培养基为MS基本培养基附加0.1mg/LNAA,生根率为89%。 (2) 以茎节为外植体,比较了液体培养和固体培养的效果,结果发现,在TDZ同一浓度下,液体培养比固体培养的分化率高,产生不定芽的时间相对较早。 2.复叶槭茎段等诱导的愈伤组织途径再生体系的建立 以茎段、叶片、子叶、叶柄为外植体,通过比较不同激素种类和浓度对不同外植体愈伤组织的诱导和分化率的影响,筛选出适合不同外植体的最佳培养基和激素组合,从而通过愈伤组织再生途径初步建立起复叶槭的组织培养再生体系。结果表明,不同外植体在不同培养基上诱导愈伤组织的颜色和质地略有差异,脱分化和再分化能力不同。茎段的脱分化和再分化能力相对最强,叶柄最差。适合茎段再分化的最佳培养基是MS基本培养基附加0.0005 mg/L TDZ和0.01 mg/L NAA,分化率是22.8%,其他外植体脱分化后没能再分化。 3.茎段等诱导的愈伤组织解剖学研究 通过组织切片技术研究了不同颜色和质地的愈伤组织以及茎节在不同时期诱导的愈伤组织的内部结构,结果表明,不同颜色和质地的愈伤组织的细胞排列方式、细胞大小等不同,浅棕色疏松等浅色系的愈伤组织多为胚性愈伤组织,从而为从颜色和质地上确定复叶槭胚性愈伤组织奠定基础。茎节在不同时期的细胞分裂有一定差异,通过组织学观察到了不定芽的形成多是经过愈伤组织途径。 4.复叶槭遗传转化的初步研究 (1) 筛选了适合复叶槭不同转化体的卡那霉素浓度。复叶槭的叶片、茎段和茎节、愈伤组织分别选用15mg/L、25mg/L、15mg/L作为筛选浓度较为适宜。比较了不同菌液浓度和感染时间对转化率的影响。结果表明,用LB液体培养基和过夜培养的菌液以1∶1稀释后感染10min转化率相对较高。 (2) 通过农杆菌介导法和针刺法,首次将蜘蛛神经毒蛋白杀虫肽基因Toxin和Bt基因导入复叶槭,经分子生物学检测,获得了复叶槭抗虫转基因愈伤组织和转基因植株。
论文目录:
摘要
Abstract
1 绪论
1.1 林木组织培养的研究现状
1.2 林木组织培养的应用
1.3 影响林木组织培养的因素
1.4 林木抗虫基因工程研究进展
1.5 植物遗传转化方法研究进展
1.6 槭树科植物组织培养研究进展
1.7 本论文研究的目的与意义
2 复叶槭不定芽途径再生体系的建立
2.1 材料和方法
2.1.1 植物材料
2.1.2 主要试剂
2.1.3 主要仪器
2.1.4 实验方法
2.2 结果与分析
2.2.1 复叶槭实生苗的获得
2.2.2 茎节消毒液种类和消毒时间的确定
2.2.3 影响复叶槭茎节或顶芽再生的因素
2.2.4 试管苗生根的诱导
2.2.5 试管苗的驯化和移栽
2.3 小结
3 茎段等诱导的愈伤组织途径再生体系的建立
3.1 材料与方法
3.1.1 植物材料
3.1.2 主要药品和仪器
3.1.3 实验方法
3.2 结果与分析
3.2.1 外植体消毒时间的确定
3.2.2 不同外植体诱导愈伤组织的形态特征
3.2.3 影响愈伤组织诱导的因素
3.2.4 不定芽的伸长培养
3.2.5 不定芽的生根培养
3.2.6 组培苗的驯化和移栽
3.3 小结
4 茎段等诱导的愈伤组织解剖学研究
4.1 材料与方法
4.1.1 材料
4.1.2 研究方法
4.2 结果与分析
4.2.1 不同颜色和质地愈伤组织的解剖学观察
4.2.2 不同时期诱导的茎节愈伤组织的解剖学观察
4.2.3 叶片诱导愈伤组织的解剖学观察
4.3 小结
5 复叶槭遗传转化的初步研究
5.1 材料与方法
5.1.1 材料
5.1.2 转化方法
5.1.3 检测方法
5.2 结果与分析
5.2.1 转化根癌农杆菌的检测
5.2.2 复叶槭转化外植体的检测
5.3 小结
6 讨论
7 结论
参考文献
附录A
附录B
攻读学位期间发表的学术论文
致谢
发布时间: 2005-10-21
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