鱼腥草炭疽病（Colletotrichum gloeosporioides）的研究

论文摘要

鱼腥草炭疽病是近年来在鱼腥草种植区发生的一种新病害。本文首次系统报道了鱼腥草炭疽病的症状、病原物鉴定、生物学特性、侵入途径、室内药剂的筛选等方面,为诊断和有效防治该病害提供了理论依据。1.病害的症状鱼腥草炭疽病主要危害叶片,亦可危害茎。叶片发病初期病斑为褐色小点,之后逐渐扩大,后期叶片正面病斑圆形或椭圆形,中央褐色,边缘紫红色,叶片背面病斑深褐色或暗褐色。植株成叶发病较重,幼嫩新叶和老叶发病较轻。茎上的病斑初呈褐色小点,后扩展为长圆形或不规则形褐色病斑。2.病原菌的种类鉴定将采集的具有鱼腥草炭疽病特征的样本进行组织分离,用分离菌的孢悬液回接鱼腥草健株,出现症状相同病害,显症后再次分离鉴定病原,其性状与接种的分离菌相同,完成柯赫式法则验证,证明分离菌是鱼腥草炭疽病的致病菌。鱼腥草炭疽病菌分生孢子盘圆形或近圆形,初为黄褐色小点,成熟后变为黑色小点；分生孢子无色,圆柱形,单孢,具1个油球,大小为13.09-23.09μm×3.09～4.24μm;附着孢深褐色,近圆形或不规则形,大小为6.30-7.51μm×4.56～6.04μm。其菌株与胶孢炭疽（Colletotrichum gloeosporioides）菌株同源性达99.8%,系统发育树支持率为100%。通过对病原菌的形态特征、培养性状观察和rDNA-ITS序列分析,按照真菌分类依据,鉴定鱼腥草炭疽病菌为半知菌亚门炭疽菌属真菌：胶孢炭疽（C. gloeosporioides）。3.鱼腥草炭疽病菌的生物学特性研究病菌在15-30℃均能生长和产孢,最适温度为28℃；加入寄主汁液和黑暗条件有利于菌丝的生长、产孢；病菌生长可利用多种糖类作为碳源,对氮源的利用以无机硝态氮最好；在pH4-10的范围内,病菌能生长和产孢,最适pH值分别为6、7；病原菌分生孢子在无菌水中萌发率极低,在鱼腥草汁液中萌发率及芽管长度显著提高；15-35℃,RH=98%,pH4-10的条件下病菌分生孢子能萌发,最适萌发条件为：30℃、水滴中和pH7。25℃、pH6时芽管伸长最快；病原菌分生孢子的致死温度为63℃。4.病原菌的侵染及其影响因素接种后6-12h分生孢子开始萌发。萌发的方式多样,可以从孢子的一端或两端长出,少见一侧一端或两端一侧长出。芽管顶端膨大形成深褐色的附着胞,附着胞上产生侵入丝。接种24-48h后可观察到侵入丝和菌丝开始侵入叶表。病菌可以通过气孔和表皮两种途径侵入。病原菌侵染鱼腥草的温度范围为15～30℃，最适发病温度范围为25-30℃,此时潜育期最短,为3-4d,病斑数量最多,病情发展最快；保湿时间范围在18-48h时,植株均能发病,最佳保湿时间为48h,其潜育期最短。5.室内药剂测定采用药皿法和玻片萌发法测定了多菌灵、百菌清、烯唑醇、甲基硫菌灵四种杀菌剂对鱼腥草炭疽病菌菌丝生长和孢子萌发的抑制作用。结果表明：多菌灵对菌丝生长和孢子萌发的抑制作用最强；甲基硫菌灵、烯唑醇这两种药剂对病菌菌丝生长和孢子萌发的抑制作用均较好；百菌清对病菌的菌丝生长和孢子萌发的抑制作用最差。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 材料与方法
• 1 鱼腥草炭疽病病菌的分离与鉴定
• 1.1 供试材料
• 1.2 方法
• 1.2.1 症状观察
• 1.2.2 病原菌的分离和致病性测定
• 1.2.2.1 分离
• 1.2.2.2 致病性测定
• 1.2.3 病原菌的种类鉴定
• 1.2.4 鱼腥草炭疽病病菌的分子生物学鉴定
• 1.2.4.1 引物
• 1.2.4.2 主要试剂的配制
• 1.2.4.3 菌丝体培养
• 1.2.4.4 CTAB法提取菌株DNA
• 1.2.4.5 PCR扩增和序列分析
• 2 鱼腥草炭疽病病菌的生物学特性研究
• 2.1 供试菌种
• 2.2 不同培养条件对菌丝生长和产孢量的影响
• 2.2.1 培养基种类对菌丝生长和产孢量的影响
• 2.2.2 温度对菌丝的生长和产孢量的影响
• 2.2.3 pH对菌丝生长和产孢量的影响
• 2.2.4 光照对菌丝生长和产孢量的影响
• 2.2.5 碳源对菌丝生长和产孢量的影响
• 2.2.6 氮源对菌丝生长和产孢量的影响
• 2.3 影响分生孢子萌发因素的测定
• 2.3.1 营养条件试验
• 2.3.2 温度试验
• 2.3.3 湿度试验
• 2.3.4 酸碱度试验
• 2.4 孢子的致死温度测定
• 3 鱼腥草炭疽病病菌的侵入途径及侵染条件的研究
• 3.1 供试材料
• 3.2 侵入途径观察
• 3.2.1 活体叶片喷雾接种
• 3.2.2 光镜样品的制备与观察
• 3.3 鱼腥草炭疽病病菌侵染条件研究
• 3.3.1 供试材料
• 3.3.2 方法
• 3.3.3 温度对病原菌侵染和发病的影响
• 3.3.4 保湿时间对病原菌侵染和发病的影响
• 4 室内药剂测定
• 4.1 供试药剂
• 4.2 试验方法
• 4.2.1 药剂对菌丝生长的抑制作用
• 4.2.2 药剂对孢子萌发的抑制作用
• 结果与分析
• 1 病原菌的分离和鉴定
• 1.1 病害症状
• 1.2 病原菌的致病性测定
• 1.3 病原菌种类鉴定
• 1.3.1 病原菌在PDA培养基上的培养性状和形态
• 1.4 病原菌的分子生物学鉴定
• 2 鱼腥草炭疽病菌的生物学特性研究
• 2.1 不同培养条件与菌丝生长和产孢量的关系
• 2.1.1 培养基种类与菌丝生长和产孢量的关系
• 2.1.2 温度与菌丝生长和产孢量的关系
• 2.1.3 pH与菌丝生长和产孢量的关系
• 2.1.4 光照对菌丝生长和产孢量的影响
• 2.1.5 碳源与菌丝生长和产孢量的关系
• 2.1.6 氮源与菌丝生长和产孢量的关系
• 2.2 影响分生孢子萌发因素的测定
• 2.2.1 营养条件与分生孢子萌发的关系
• 2.2.2 温度与分生孢子萌发的关系
• 2.2.3 湿度与分生孢子萌发的关系
• 2.2.4 酸碱度与分生孢子萌发的关系
• 2.3 孢子的致死温度
• 3 病原菌侵入途径和侵染条件的研究
• 3.1 侵染结构和侵入途径的研究
• 3.2 病原菌侵染条件的研究
• 3.2.1 温度对病原菌侵染的影响
• 3.2.2 保湿时间对病原菌侵染的影响
• 4 室内药剂测定
• 4.1 药剂对菌丝生长的抑制作用
• 4.2 药剂对孢子萌发的抑制作用
• 结论与讨论
• 1 病原菌的种类鉴定
• 2 鱼腥草炭疽病菌的生物学特性研究
• 3 病原菌孢子萌发和侵入途径的观察
• 4 病原菌侵染条件的研究
• 5 室内药剂测定
• 参考文献
• 致谢
• 附录