MiR-9通过靶定NF-κB1调控卵巢癌细胞增殖

论文摘要

[研究背景和目的]核因子kappaB （NF-κB）是一种重要的核内转录因子,它在多种信号途径中起第二信使的作用,并且对肿瘤发生发展起着举足轻重的作用,NF-κB二聚体最常见的形式是p50/p65。NF-κB1基因编码的105kD（P105）蛋白是Rel蛋白特异性的转录抑制因子,它经激活后剪切产生50kD（P50）蛋白是NFκB复合体的DNA结合亚单位,可以激活多种基因的转录。microRNA是近年来发现的一类小的非编码RNA,它与靶基因的3’UTR区完全或不完全互补配对结合,在转录后抑制基因表达。本研究发现NF-κB1基因在卵巢癌细胞中高表达,通过实验证明了NF-κB1为miR-9直接的靶基因,并且进一步研究了miR-9对卵巢癌细胞生长活性的影响。[方法]本实验首先运用半定量RT-PCR方法对4份卵巢癌标本和4份卵巢癌病人癌旁正常组织中NF-κB1的mRNA水平的表达差异进行了分析,随后通过靶基因预测网站找到对其有特定封闭作用的miR-9,并构建EGFP荧光报告载体在人卵巢癌细胞系ES-2细胞中验证miR-9对其靶基因的直接调控作用。然后用miR-9ASO封闭内源性miR-9,并同时构建miR-9过表达载体pcDNA3B/pri-9使miR-9在细胞中过表达,运用半定量RT-PCR和Western blot的方法分别验证了靶基因在mRNA和蛋白水平的表达变化,再次验证miR-9对靶基因的作用。此外本研究还进一步研究了miR-9对癌细胞增殖活性和增殖能力的影响,通过封闭内源性miR-9或者使miR-9过表达,分别使用MTT的方法和细胞克隆形成实验,检测卵巢癌细胞生长活性和增殖能力的变化。[结果]NF-κB1在卵巢癌组织中相对卵巢正常组织中呈高表达。荧光报告载体实验证实,miR-9能够通过作用于NF-κB1 3’UTR对其表达进行负性调节。在ES-2细胞中,过表达miR-9可以降低NF-κB1在mRNA和蛋白水平的表达,可以使ES-2细胞的生长活性受到抑制。实验还表明封闭内源性miR-9会使NF-KB1在mRNA和蛋白水平的表达增高,ES-2细胞的生长活性增高。[结论]本研究发现NF-κB1在卵巢癌癌组织中高表达,过表达miR-9可以直接使NF-κB1的表达水平降低,继而使癌细胞的生长活性降低。本实验通过使用microRNA抑制NF-κB1而使癌细胞增殖活性降低,可以为卵巢癌治疗新方法的研究提供一些参考。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 研究现状、成果
• 研究目的、方法
• 对象和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 MicroRNA调节与个体发育
• 综述参考文献
• 致谢