植物药介导ERK、TGF-β改善和治疗糖尿病肾病

论文摘要

我国劳动人民几千年来在与疾病作斗争的过程中,通过实践,不断认识,逐渐积累了丰富的中草药知识。中药有疗效持久和副作用少等相比于西药特有的优点。很多中药的疗效不但经受住了长期医疗实践的检验,而且也已被科学研究所证实。但由于中药有效成分的复杂性,人们对中草药药效的怀疑性,及很多中药的药用机理至今仍未被我们所完全认知,阻碍了中药的广泛推广和应用。因此,深入研究中药的有效成分及探讨其药用机理显得十分迫切。本文通过细胞水平从九种活血化瘀植物药中筛选有效药物,进而观察植物药介导ERK、TGF-β下,大鼠糖尿病肾病改善情况。一)通过煎煮、浓缩和冻干,最终获得九种植物药的冻干粉；二)体外实验1)MTT实验：发现了活血化瘀植物水提取物（除虎杖）在1mg/ml下对细胞增值没有影响,从而确定了药物用药范围；2)通过加入rhTGF-βl建立细胞过表达细胞外基质的模型；3)利用2)建立的模型,加入各种活血化瘀植物药水提取物（终浓度200μg/ml）,观察对p-Smad2的影响,发现泽兰水提取物能够显著逆转rhTGF-βl刺激增加的p-Smad2蛋白,而对Smad2蛋白没影响；4)具体的研究了泽兰水提取物对TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ、p-Smad2、Smad2、Smad4、Smad7、p-ERK1/2和ERK1/2蛋白表达的影响,首先发现rhTGF-β能显著的提高TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱp-Smad2、Smad2、Smad4和p-ERK1/2蛋白表达,随后研究发现泽兰能够显著减少TβR-Ⅱ、p-Smad2、Smad4、Smad7、p-ERK1/2蛋白表达（与rhTGF-β1刺激组相比）,对Smad2、ERK1/2和TβR-Ⅰ蛋白表达没有影响,减少Smad7的表达。三)体外实验1)成功建立了大鼠糖尿病肾病模型,为后续的药物实验研究提供了保证；2研究发现泽兰水提取物用药组虽不能降低血糖,增加体重和减少尿量,但与模型组相比能显著降低SCr, BUN、尿蛋白（P<0.05）,提高SOD活性（P<0.05）；3) RT-PCR的结果显示泽兰中剂量组（6g/kg/day）的大鼠TGF-β1的mRNA显著性显著下降（与模型组相比）；Western blot（WB）实验结果发现泽兰用药组能够显著性见降低p-Smad2的蛋白表达（P<0.01）,但对Smad2的蛋白表达没有影响。

论文目录

• 致谢
• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1、DN与TGF-β1的关系
• 2、TGF-β信号通路研究现状
• 3、活血化瘀药物的分类及相关植物的介绍
• 4、活血化瘀药物使用现状
• 5、本课题的研究目的和意义
• 第二章 TGF-β通路的中药抑制剂的研究
• 1 材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.1.1 活血化瘀中药
• 1.1.2 实验的细胞株
• 1.2 主要仪器和试剂
• 1.2.1 主要仪器
• 1.2.2 主要试剂配制
• 1.3 方法
• 1.3.1 活血化瘀中药水提物的制备
• 1.3.2 九种活血化瘀药物的毒性实验
• 1.3.3 TGF-β1对p-Smad2的影响
• 1.3.4 活血化瘀药物对p-Smad2的影响
• 1.3.5 泽兰对TGF-β信号通路的其他因子的影响
• 2. 实验结果及分析
• 2.1 活血化瘀药物的水提取产物
• 2.2 活血化瘀中药的MTT实验
• 2.3 TGF-β1刺激p-Smad2的最佳时间
• 2.4 有效活血化瘀中药的筛选
• 2.5 不同浓度泽兰对SV40 MES13细胞内的pSmad2的影响
• 2.6 泽兰对TGF-β信号通路的其他因子的影响
• 3. 讨论
• 4. 结论
• 第三章 泽兰水提取物对糖尿病肾病纤维化的影响
• 1 材料和方法
• 1.1 实验动物
• 1.2 糖尿病造模试剂
• 1.3 主要实验仪器和药品
• 1.3.1 主要仪器
• 1.3.2 药品
• 1.4 方法
• 1.4.1 生理生化指标测定
• 1.4.2 肾脏的病理学检查
• 1.4.3 RT-PCR检测肾皮质TGF-β1
• 1.4.4 western检测p-Smad2表达变化
• 2 结果
• 2.1 中药泽兰对大鼠体重、尿量和尿蛋白的影响
• 2.2 中药泽兰对大鼠生理生化指标的影响
• 2.3 肾小球组织病理改变
• 2.4 泽兰对肾小球内TGF-β1的mRNA的影响
• 2.5 泽兰对肾小球内pSmad2的影响
• 3 讨论
• 4. 结论
• 小结、创新点与不足之处
• 参考文献
• 详细摘要
• Abstract