实时定量PCR法研究嗜铬细胞瘤的基因表达

论文摘要

嗜铬细胞瘤是引起继发性高血压的重要原因,其发病机制目前还不完全清楚,临床上早期鉴别良恶性肿瘤尚有困难。我们选取4例正常肾上腺髓质组织、8例良性和10例恶性嗜铬细胞瘤,应用实时定量PCR法测定LRPlB（低密度脂蛋白受体相关蛋白1b）、EPAS1（内皮PAS结合域蛋白1）、Grap-2（Grb-2相关接头蛋白2）基因的表达情况,从基因水平上为研究嗜铬细胞瘤的发病机制、早期鉴别良、恶性肿瘤及治疗提供实验室依据。研究表明,抑癌基因LRP1B在正常肾上腺髓质中的表达高于嗜铬细胞瘤组织,且与肿瘤增殖抗原Ki-67呈明显负相关,EPAS1基因在良性副神经节瘤和恶性肾上腺嗜铬细胞瘤中的表达均高于恶性副神经节瘤,EPAS1和Grap-2基因的表达有一定的相关性。上述结果国内外文献未见报告。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 英文缩略词表
• 前言
• 材料和方法
• 1. 实验材料
• 1.1 研究对象
• 1.2 主要仪器及设备
• 1.3 主要试剂
• 1.4 主要试剂配制
• 2. 实验方法
• 2.1 组织总RNA的提取
• 2.2 反转录成cDNA第一链（RT）
• 2.3 引物的设计与合成
• 2.4 实时荧光定量PCR
• 2.5 统计方法
• 实验结果
• 1. 组织RNA提取及鉴定
• 2. 实时荧光定量 PCR结果
• 2.1 实时荧光定量PCR实验条件优化
• 2.2 实时荧光定量PCR扩增曲线和熔解曲线
• 2.3 LRP1B基因在不同组织中的表达及临床意义
• 2.4 EPAS1基因在不同组织中的表达
• 2.5 Grap-2基因在不同组织中的表达
• 讨论
• 1. 实验方法学
• 1.1 实验样本
• 1.2 实时荧光定量 PCR
• 1.2.1 SYBR Green I基本原理
• 1.2.2 实时定量PCR优点及应用
• 1.2.3 实时定量PCR的相对定量
• 2. 嗜铬细胞瘤组织中基因表达的差异
• 2.1 LRP1B基因在嗜铬细胞瘤中的差异表达
• 2.2 EPAS1和 Grap-2基因在嗜铬细胞瘤中的差异表达
• 3. 本实验的不足
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 综述
• 参考文献
• 致谢