三丁基锡对雄性小鼠性腺发育的影响及其机制的初步研究

论文摘要

三丁基锡（TBT）是一种重要的有机锡类化合物,在环境中大量使用,具有很强的毒性。近年,许多研究表明TBT对软体动物和鱼类生殖机能产生影响,但是有关对哺乳动物的生殖影响报道较少。本实验以青春期雄性小鼠为研究对象,在生态条件下和环境污染浓度范围内,采用不同浓度TBT（0.5、5、50μg/kg）对其进行灌胃染毒,每三天灌胃一次,暴露30天。通过光学显微镜观察精子质量;放射免疫法检测睾丸性激素水平;western blotting方法检测性激素受体水平以及PCNA表达水平;并利用TUNEL法检测细胞凋亡情况,最终分析TBT对雄性小鼠性腺发育的影响及其作用机理。实验结果如下:1.TBT暴露30天后,青春期雄性小鼠体重没有出现显著变化,性腺指数呈剂量—依赖性下降,高浓度组出现显著性差异。组织学观察发现低浓度组和中浓度组曲细精管内细胞少量脱落,而高浓度组管内细胞层数则大幅减少,精细胞脱落,分布散乱;2.TBT暴露影响了小鼠精子发生,通过对小鼠附睾精子质量的检测,结果表明附睾中的精子数量和精子存活率与对照组相比都有显著性下降,中浓度组和高浓度组的畸形率显著上升,且都呈剂量一效应关系;3.TBT暴露30天后,免疫组化等方法发现TBT降低PCNA在精细胞中的表达水平,表现出剂量—效应性关系,其中中浓度和高浓度与对照组相比都有显著性差异;TUNEL实验显示TBT暴露能够诱导睾丸细胞的凋亡,且凋亡主要发生在精原细胞和精母细胞中,也呈剂量—效应关系;4.TBT暴露后小鼠睾丸中睾酮水平没有显著变化,但17β-雌二醇水平却呈剂量—依赖性下降,其中50μg/kg组的17β-雌二醇水平与对照组相比有显著性差异,同时western blotting还显示在5μg/kg和50μg/kg暴露组中,TBT显著抑制睾丸雌激素受体（ER-α和ER-β）的水平,提高小鼠睾丸中雄激素受体（AR）的表达,并都呈剂量—效应性关系。综上所述,低剂量的TBT暴露能够抑制雄性小鼠性腺的发育,影响精子的发生。同时,TBT使睾丸中17β-雌二醇水平产生下降,表明TBT诱导的激素水平的变化是其抑制性腺发育的机制之一。另外,在本实验中,由于TBT的作用,小鼠睾丸性激素受体水平受到明显影响,精细胞凋亡增加,这也为TBT抑制性腺发育提出了新的机制。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 前言
• 一、有机锡污染现状
• 二、有机锡对哺乳动物的生殖毒性
• 三、小鼠性腺发育调控机制
• 1 小鼠性腺的功能形态学
• 2 细胞增殖和细胞凋亡
• 3 性激素及其受体
• 四、本研究的目的、意义和主要内容
• 第二章 材料和方法
• 一、实验材料
• 二、仪器和试剂
• 1 实验仪器
• 2 常用试剂
• 三、污染实验
• 1 剂量设置和染毒
• 2 取样
• 四、精子质量检测
• 1 精子密度检测
• 2 精子存活率计算
• 3 精子畸形观察
• 五、组织学
• 1 H E.染色
• 2 性腺组织学分析
• 3 免疫组织化学
• 4 TUNEL检测细胞凋亡
• 六、Western blotting分析
• 1 样品预处理
• 2 SDS--聚丙烯酰胺凝胶电泳与Western blotting试剂配方
• 3 SDS--聚丙烯酰胺凝胶电泳与Western blotting分析
• 七、激素测定
• 1 性腺预处理
• 2 测定方法
• 八、数据处理
• 第三章 结果
• 一、TBT暴露对雄性小鼠精巢发育的影响
• 1 TBT暴露对雄性昆明小鼠体重、睾丸重量的影响
• 2 TBT暴露对雄性昆明小鼠精子发生的影响
• 3 TBT暴露对雄性昆明小鼠精巢的组织学的影响
• 4 TBT暴露对雄性昆明小鼠精巢的PCNA蛋白表达的影响
• 5 TBT暴露对雄性昆明小鼠精巢细胞凋亡的影响
• 6 TBT暴露对雄性昆明小鼠精巢内睾酮激素和17β--雌二醇水平的影响
• 7 TBT暴露对雄性昆明小鼠精巢内睾酮激素受体和雌激素受体α和β表达的影响
• 第四章 讨论
• 一、TBT暴露对雄性昆明小鼠体重和睾丸重量的影响
• 二、TBT暴露对雄性昆明小鼠睾丸组织学的影响
• 三、TBT暴露对雄性昆明小鼠精子发生和睾丸细胞增殖的影响
• 四、TBT暴露对雄性昆明小鼠睾丸细胞凋亡的影响
• 五、TBT暴露对雄性昆明小鼠睾丸激素水平的影响
• 六、TBT暴露对雄性昆明小鼠睾丸激素受体水平的影响
• 结论
• 参考文献
• 硕士阶段发表的论文
• 致谢