论文摘要
IgA肾病（IgA nephropathy, IgAN）是以肾小球系膜区IgA沉积为特征的最常见的原发性肾小球疾病。约占我国原发性肾小球疾病的40%-47%。该病发病率高,长期的随访发现IgA肾病是慢性进展的疾病,10-20年后约50%患者进入终末期肾功能衰竭（尿毒症）,是导致终末期肾功能衰竭的最主要原发性肾小球疾病。目前研究发现,约40%以上的IgAN患者表现为上呼吸道感染（包括扁桃体炎）后症状发作或加重,而切除扁桃体后能明显改善尿检异常,有效降低循环中高lgA水平,重复肾活检显示,系膜区沉积的IgA强度减弱,通过超过10年的随访发现扁桃体摘除组患者肾脏长期存活率明显高于非扁桃体手术组患者,提示扁桃体免疫可能在IgAN发病机制中起重要作用。很多证据表明IgA肾病患者存在IgA产生的异常,血清IgA水平升高,循环IgA免疫复合物增加,外周血中分泌IgA的细胞增多,体外培养时外周血单个核细胞IgA产生异常,都提示IgA产生增多可能是IgA肾病发病的中心环节。Suzuki S等发现副流感嗜血杆菌蛋白刺激使扁桃体单个核细胞增殖更明显,IgA、IgA1水平明显升高。葡萄球菌M蛋白刺激上调IgAN扁桃体淋巴细胞TGF-β的产生,诱导分泌IgA的浆细胞增多。柯萨奇B4病毒反复注射小鼠可以诱导与IgA肾病类似的系膜区IgA和病毒基因的沉积。提示IgA肾病的发生与上呼吸道尤其是扁桃体对环境中存在的细菌或病毒抗原的粘膜免疫反应异常有关。前期我们分离鉴定了37例IgA肾病病人和37例非肾炎慢性扁桃体炎病人的扁桃体隐窝细菌,发现两组之间细菌谱和数量无明显差异；所有病人均检测到甲型链球菌（a-Hemolytic streptococcus,HS）。来源于IgA肾病组和慢性扁桃体炎组的甲型链球菌灭活菌株刺激IgA肾病扁桃体淋巴细胞促进J链mRNA阳性IgA细胞数增多。因此我们选择甲型链球菌灭活菌株、细菌脂多糖体外刺激模拟上呼吸道感染对IgA肾病病人扁桃体单个核细胞的刺激作用。探讨1. IgA肾病组病人扁桃体单个核细胞增殖和IgA及IgA1的产生。2.IgA肾病病人扁桃体B淋巴细胞Iα-Cα胚系转录本（Iα-Cαgermline transcript）、激活诱导的胞嘧啶脱氨酶（activation induced cytidine deaminase;AID） mRNA的表达。3.IgA肾病病人扁桃体单个核细胞Th细胞因子IFN-γ、IL-4基因和蛋白表达。4. IgA肾病病人扁桃体单个核细胞IgA受体FcαRI表达及甲型链球菌灭活菌株、细菌脂多糖刺激下FcαRI表达的变化。目的体外模拟上呼吸道感染对扁桃体单个核细胞的刺激作用,观察不同浓度灭活甲型链球菌菌株、细菌脂多糖对IgA肾病病人扁桃体单个核细胞增殖的影响。观察灭活甲型链球菌菌株、细菌脂多糖对IgA肾病病人扁桃体单个核细胞分泌IgA、IgA1的影响。方法1.收集26例IgAN病人及25例非肾炎慢性扁桃体炎病人手术摘除的扁桃体2.分离培养两组病人腭扁桃体单个核细胞3.制备甲型链球菌灭活菌株4. MTT检测不同浓度甲型链球菌灭活菌株、细菌脂多糖对扁桃体单个核细胞增殖的影响5.甲型链球菌灭活菌株、脂多糖刺激体外培养扁桃体单个核细胞72小时后收集细胞培养上清液,ELISA检测IgA、IgA1的表达。结果1 IgA肾病组较非IgA肾病组扁桃体单个核细胞增殖更明显,有统计学意义（P<0.05）。10μg/ml脂多糖刺激72小时IgA肾病组较非IgA肾病组扁桃体单个核细胞增殖更明显,有统计学意义（P<0.05）。扁桃体单个核细胞增殖水平随脂多糖刺激浓度的增加而增加；IgA肾病组5μg/ml组、10μg/ml组较0μg/ml组增殖更明显,有统计学意义（P<0.05）。2扁桃体单个核细胞增殖水平随甲型链球菌灭活菌株刺激浓度的增加而增加；与未刺激组相比,1×108cfu/ml组、5×107cfu/ml组、2.5×107cfu/ml组增殖更明显（P<0.01）。与2.5×107cfu/ml组、5×107cfu/ml组相比,1×108cfu/ml组增殖更明显（P<0.01；P<0.05）。3 IgA肾病组较非IgA肾病组扁桃体单个核细胞体外培养72h上清液IgA分泌增加（32.48±9.81ng/ml vs 23.33±7.20ng/ml P<0.05）。10μg/ml脂多糖、1×108cfu/ml甲型链球菌灭活菌株分别刺激72h后,IgA肾病组较非IgA肾病组扁桃体单个核细胞IgA分泌增加,有统计学意义（36.24±6.51ng/ml vs 25.87±7.52ng/ml P<0.01；43.76±10-36ng/ml vs 31.24±7.17ng/ml P<0.05）.4 IgA肾病组较非IgA肾病组扁桃体单个核细胞IgA1分泌稍有增加,但无统计学差异。10μg／ml脂多糖、1×108cfu/ml甲型链球菌灭活菌株分别刺激72h后,IgA肾病组较非IgA肾病组扁桃体单个核细胞IgA1分泌增加,有统计学意义（26.56±5.76ng/ml vs 19.72±4.16ng/ml P<0.05；35.68±7.84ng/ml vs 23.61±5.06ng/ml P<0.01）.5 1×108cfu/ml甲型链球菌灭活菌株刺激72h后,IgA肾病组较非IgA肾病组扁桃体单个核细胞体外培养上清液IgA1/IgA比例上调。（52.46±15.17% vs 66.00±24.98%P<0.05）。结论1.未刺激和脂多糖刺激后,IgA肾病组较非IgA肾病组扁桃体单个核细胞增殖更明显。2.甲型链球菌灭活菌株、细菌脂多糖刺激后,IgA肾病组扁桃体单个核细胞IgA、IgA1产生明显增加。3.甲型链球菌灭活菌株刺激后IgA肾病组扁桃体单个核细胞体外培养上清液IgA1、IgA比例上升。提示IgA肾病患者的扁桃体免疫可能存在过高的应答状态导致IgA产生增多。目的研究IgAN组与对照组扁桃体单个核细胞IgA类别转换相关基因表达水平。从基因水平探讨IgAN组扁桃体单个核细胞IgA产生异常的分子机制。方法1.收集IgAN病人及非肾炎慢性扁桃体炎病人手术摘除的扁桃体。2.分离两组病人扁桃体单个核细胞并提取细胞总RNA。3.实时定量荧光PCR检测Iα-Cα胚系转录本（Iα-Cαgermline transcript）、激活诱导的胞嘧啶脱氨酶（AID） mRNA的表达。结果1 IgA肾病组较非IgA肾病组扁桃体单个核细胞Iα-Cα胚系转录本mRNA的表达上调（100±22.72% vs 6.80±7.28%P<0.01）。2 IgA肾病组较非IgA肾病组扁桃体单个核细胞激活诱导的胞嘧啶脱氨酶（AID） mRNA的表达上调（100±5.44% vs 26.62±6.19%P<0.05）。结论IgA肾病病人扁桃体单个核细胞Iα-Cα胚系转录本、激活诱导的胞嘧啶脱氨酶（AID）基因表达水平上调；可能与IgA肾病病人扁桃体IgA产生异常有关。目的观察甲型链球菌灭活菌株、细菌脂多糖刺激下IgA肾病扁桃体单个核细胞培养上清液IFN-γ,IL-4表达的变化。研究IgAN组与对照组扁桃体单个核细胞IFN-γ、IL-4基因表达水平。方法1.收集26例IgAN病人及25例非肾炎慢性扁桃体炎病人手术摘除的扁桃体。2.分离培养两组病人扁桃体单个核细胞。3.实时定量荧光PCR检测IFN-γ、IL-4mRNA的表达。4.甲型链球菌的灭活菌株、细菌脂多糖刺激体外培养扁桃体单个核细胞72小时后收集细胞培养上清液,ELISA检测IFN-γ、IL-4的表达。结果1.IgA肾病组较非IgA肾病组扁桃体单个核细胞培养上清液IFN-γ表达上调（638.98±178.41pg/ml vs 400.76±136.43pg/ml P<0.01）.1×108cfu/ml甲型链球菌灭活菌株刺激72h IgA肾病组较非IgA肾病组扁桃体单个核细胞培养上清液IFN-γ表达下调（466.96±221.69pg/ml vs 671.84±232.31pg/ml P<0.05）.10μg／ml脂多糖刺激72h IgA肾病组较非IgA肾病组扁桃体单个核细胞培养上清液IFN-γ表达上调（655.04±223.97pg/ml vs 398.33±180.63pg/ml P<0.05）.2.IgA肾病组较非IgA肾病组扁桃体单个核细胞培养上清液IL-4表达上调（17.72±6.29pg/ml vs 7.29±3.04pg/ml P<0.01）.1×108cfu/ml甲型链球菌灭活菌株、10μg/ml脂多糖刺激72hIgA肾病组较非IgA肾病组扁桃体单个核细胞培养上清液IL-4表达上调（30.65±7.38pg/ml vs 8.67±3.15pg/ml P<0.01；21.55±5.16pg/ml vs 8.0±3.78pg/ml P<0.01）.3.IgA肾病组较非IgA肾病组扁桃体单个核细胞IFN-γmRNA的表达上调（100±0.69％vs 6.85±4.07％P<0.01）.4 IgA肾病组较非IgA肾病组扁桃体单个核细胞IL-4mRNA的表达上调（100±1.25% vs 36.92±0.95%P<0.01）。结论1 IgA肾病扁桃体单个核细胞细胞因子IFN-γ、IL-4分泌增加和基因表达水平上调。2甲型链球菌灭活菌株刺激下IgA肾病扁桃体分泌IFN-γ下调；IL-4上调。3细菌脂多糖刺激下IgA肾病扁桃体分泌IFN-γ和IL-4上调。提示IgA肾病扁桃体Th细胞因子表达上调,在适应性免疫应答中Th2细胞因子占优势,可能参与IgAN的发生,发展。目的研究IgAN组与对照组扁桃体单个核细胞IgA受体FcαRI表达水平。观察甲型链球菌灭活菌株、细菌脂多糖刺激下IgA肾病扁桃体单个核细胞IgA受体FcαRI表达的变化。方法1.收集26例IgAN病人及25例非肾炎慢性扁桃体炎病人手术摘除的扁桃体。2.分离培养两组病人扁桃体单个核细胞3.实时定量荧光PCR检测FcaRImRNA的表达4.甲型链球菌灭活菌株、细菌脂多糖刺激体外培养扁桃体单个核细胞72小时,流式细胞仪检测扁桃体单个核细胞FcαRI阳性细胞数结果1 IgA肾病组较非IgA肾病组扁桃体单个核细胞IgA受体FcαRI表达上调,有统计学意义（2.27±1.16% vs 1.11±0.5%P<0.05）。10μg/ml脂多糖刺激72h后,IgA肾病组较非IgA肾病组扁桃体单个核细胞IgA受体FcαRI表达略有上调,但无统计学差异。1×108cfu／ml甲型链球菌灭活菌株刺激72h后,IgA肾病组较非IgA肾病组扁桃体单个核细胞IgA受体FcαRI表达上调,有统计学意义（4.08±1.39%vs 1.46±0.69%P<0.01）。2 IgA肾病组扁桃体单个核细胞IgA受体FcαRI表达与细胞因子IFN-γ表达呈正相关（r=0.641 P<0.05）；与IL-4表达呈负相关（r=-0.721 P<0.05）。3 IgA肾病组较非IgA肾病组扁桃体单个核细胞IgA受体FcαRI mRNA表达上调（100±1.19% vs 5.30±7.70%P<0.05）。结论IgA肾病扁桃体单个核细胞IgA受体FcαRI表达上调,可能与扁桃体局部的细胞因子微环境有关；从而参与扁桃体过强的免疫效应。
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