论文摘要
目的:（1）诱导建立人肺腺癌多药耐药细胞系A549/CDDP;（2）观察多西紫杉醇对肺腺癌细胞A549及其多药耐药细胞A549/CDDP的生长抑制作用、细胞周期影响和诱导凋亡作用;（3）初步探讨bcl-2、bax、Fas、p53、c-myc等凋亡相关蛋白在多西紫杉醇抗肿瘤作用机制中的作用。 方法:（1）以人肺腺癌细胞系A549为诱导对象,顺铂为诱导药物,采用恒定药物浓度、周期性作用的方法,建立在1μg/ml顺铂作用下生长良好的耐药系A549/CDDP。应用MTT法检测耐药细胞及其亲代细胞对不同化疗药物的敏感性,倒置显微镜及透射电镜观察其细胞形态,流式细胞仪检测其细胞周期。（2）应用光镜、透射电镜、集落形成试验和MTT法等,检测耐药细胞及其亲代细胞在多西紫杉醇作用后形态学、细胞生长曲线、集落形成能力和生长抑制率的变化;应用流式细胞仪检测细胞周期变化;应用透射电镜、TUNEL、Annexin V/PI双染法观察多西紫杉醇诱导细胞凋亡。（3）应用SP细胞免疫化学方法,检测bcl-2、bax、Fas、p53、c-myc等凋亡相关蛋白在多西紫杉醇作用A549及A549/CDDP细胞前后的表达情况。 结果:（1）成功诱导建立了人肺腺癌多药耐药细胞系A549/CDDP。MTT药物敏感性检测结果表明,A549/CDDP细胞对顺铂、羟基喜树碱、长春新碱和5-氟尿嘧啶等4种化疗药物有不同程度的耐受性,其耐药指数分别为12.00、2.29、8.6、16.84。细胞超微结构观察发现,相对亲代细胞,耐药细胞体积偏大,分化较好,核仁大而多,核浆比例大,线粒体短小且具有老化、退变现象,同时胞质内可见较多空泡和板层小体。细胞生长曲线和细胞倍增时间测定结果表明,耐药细胞与其亲代细胞增殖速度接近,细胞周期结果显示耐药细胞较亲代细胞S期明显增多（P<0.05）。（2）多西紫杉醇对A549及A549/CDDP细胞均具有明显的生长抑制作用,并在0.1～2μg/ml剂量范围内存在剂量及时间依赖关系。A549/CDDP细胞在多西紫杉醇作用12～24h较亲代细胞敏感（P<0.01）,在48h较亲代细胞耐受（P<0.01）,在72h则与亲代细胞间无显著性差异（P>0.05）。（3）多西紫杉醇对A549及A549/CDDP细胞均具有显著的G2/M期阻滞作用,亲代细胞还表现出时间依赖性,而耐药细胞于48h后出现四倍体细胞,结合形态学观
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