论文题目: MINT蛋白同源二聚体形成及对其介导的转录抑制作用的拮抗
论文类型: 博士论文
论文专业: 发育生物学
作者: 李军林
导师: 韩骅
关键词: 相互作用核基质蛋白,蛋白质蛋白质相互作用,信号转导途径,转录调控
文献来源: 第四军医大学
发表年度: 2005
论文摘要: 中文摘要 调控细胞增殖与分化的细胞间相互作用在生物发育、成熟、衰老和疾病发生等方面发挥重要作用,蛋白质-蛋白质和蛋白质-核酸之间的相互作用是细胞相互作用的物质基础。研究信号转导途径中蛋白与蛋白之间或者转录因子之间相互作用对于掌握调控机制和分子组成以及揭示生命活动现象的本质有重要意义。在生物发育过程中,Notch信号途径是一类调控细胞增殖与分化的重要调控途径。目前发现,Notch信号途径对于眼、胰腺、牙齿的发育以及神经系统的发生与再生都具有重要调控作用。Notch基因始于对果蝇突变体翅边缘出现缺刻而得名,Notch受体和配体在结构和功能方面表现出进化上高度保守性,从低等的线虫到哺乳动物普遍存在,该信号途径在调控网络中处于较为基础地位。 在对Notch信号途径的组成和调控机制研究过程中发现RAM7(RBP-Jkappa associated molecule 7)分子可以和Notch胞内段(Notch intracellular domain)竞争性结合中心效应子RBP-J(Recombination signal binding protein-Jkappa)发生相互作用,形成转录调控的复合物,调控下游基因表达。后来证实RAM7就是Msx2(Muscle segment homeobox 2)-相互作用核基质蛋白MINT(Msx2-interacting nuclear target protein),MINT蛋白与Msx2参与面颅骨和神经发育。在细胞内采用Western blot的方法检测到MINT蛋白被裂解成110 KDa(Kilo Dalton)禾D250 KDa两个片段。氨基酸序列分析发现MINT蛋白有3个RNA识别基序(RNA recognition motifs,RRMs)和4个核定位信号(Nuclear localization signal, NLs)。掘报道,果蝇Spen(Split ends)蛋白与Msx2, RAR(retinoic acid receptor)以及RBP-J相互作用调控转录。MINT蛋白可以与NCOR/SMRT(Nuclear receptor co-repressor/silencing mediator for retinoid and thyroid hormone receptor)相互作用,募集组蛋白去乙酰化酶(Histone deacetylases, HDACs)发挥转录抑制作用;MINT缺陷导致胚胎期致死。基因剔除小鼠研究中发
论文目录:
缩略语表
中文摘要
英文摘要
前言
文献回顾
正文
1 实验材料和主要仪器
1.1 质粒和菌种
1.2 试剂
1.3 实验仪器
2 实验方法
2.1 质粒构建
2.2 cDNA文库
2.3 酵母转化
2.4 酵母质粒的提取
2.5 氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞
2.6 重组质粒转化
2.7 重组质粒的鉴定
2.8 蛋白表达
2.9 蛋白纯化
2.10 Western-blot检测
2.11 细胞转染
2.12 MINT-F6与MINT相互作用的区域
2.13 GST pull-down assay
2.14免疫共沉淀
2.15哺乳动物细胞双杂交
2.16 RePorter assay
3实验结果
3.1 MINT-F6与MINT的相互作用
3.2 GST-pull down assay 验证MINT蛋白在C端发生自身相互作用
3.3细胞内核基质蛋白MINT可以发生相互作用
3.4截短体试验分析相互作用位点
3.5 MINT蛋白自身相互作用对于Notch/RBP-J 转录调控的影响
4讨论
4.1蛋白质之间的相互作用多种研究方法的互补性
4.2酵母双杂交方法筛选到MINT可以发生自身相互作用
4.3 体内体外条件下MINT蛋白质可以发生自身相互作用
4.4 MINT-F6片断截短体GST pull-down试验结果显示在体外条件下MINI蛋白质自身相互作用发生在SPOC结构域。
4.5 MINT蛋白质自身相互作用对Notch/RBP-信号途径转录调控的影响
4.6 MINT-F6一NLS显性负突变效应
5.结论
参考文献
个人简历
研究成果
致谢
发布时间: 2005-07-19
参考文献
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标签：相互作用核基质蛋白论文; 蛋白质蛋白质相互作用论文; 信号转导途径论文; 转录调控论文;