论文摘要
目的:研究肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）在转化生长因子-β1（transforming growth factor β1,TGF-β1）诱导人肾小管上皮-肌成纤维细胞转分化（epithelial-myofibriblast Transition,EMT）过程中发挥的作用及可能机制。方法:用含10%胎牛血清（FBS）的DMEM/F12（1:1）培养液培养将HKC 细胞培养于24 孔板或培养瓶中,细胞长到约60-70%融合时,吸弃旧培养基,换成无血清（serum-free medium,FSM）同步24 小时,然后分组如下:①对照（C）组:分别用FSM（Cf）、U0126 20umol/l（Cu）、SB202190 20umol/l（Csb）、curcumin100umol/l（Ccu）培养细胞48h;②TGF-β1（T）组:用TGF-β110ng/ml分别与FSM （Tf）、U0126 20umol/l （Tu）、SB202190 20umol/l （Tsb）、curcumin100umol/l （Tcu）培养细胞48h;③HGF（H）组:用HGF100ng/ml 分别与FSM （Hf）、U0126 20umol/l （Hu）、SB202190 20umol/l （Hsb）、curcumin100umol/l （Hcu） 培养细胞48h ; ④HGF+TGF-β1（HT） 组: TGF-β110ng/ml+ HGF100ng/ml 分别与FSM（HTf）、U0126 20umol/l（HTu）、SB202190 20umol/l（HTsb）、curcumin100umol/l（HTcu）培养细胞48h。相差显微镜观察HKC 细胞的形态变化;间接免疫荧光法检测E-cadherin、α-SMA 和c-Jun 的表达;半定量RT-PCR 分析α-SMA和c-Jun mRNA 表达的变化;Western blot 分析c-Jun 蛋白表达的变化。结果:1、细胞形态观察:①C 组:Cf组细胞呈卵石样紧密排列生长,Cu、Csb、Ccu 组与Cf 组形态相似;②T 组:Tf 组细胞出现显著的形态改变,表现为细胞之间间隙增大,细胞长短径比例增加,细胞呈梭形,部分细胞和附近的细胞脱离接触,失去卵石样形态;Tu、Tsb、Tcu组,细胞呈梭形,形态与Tf组相似。③H 组:Hf、Hu、Hsb、Hcu 组细胞呈卵圆形,与Cf 组细胞形态相似。④HT 组:HTf 组,细胞保持原有的卵圆形态;HTu、HTsb 组,与HTf 组细胞形态形相似,细胞呈卵圆形;HTcu组,部分细胞呈梭形。2、免疫荧光:①a-SMA:正常HKC 细胞不表达a-SMA,未见荧光染色。TGF-β1诱导细胞表达a-SMA,细胞可见耀眼的荧光染色,主要分布在胞浆中。HGF 可以减少
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