棉花原生质体培养与融合

论文摘要

棉花是重要的经济作物，棉花种质资源的创新是棉花遗传育种的基础。丰富的棉花野生种是一个宝贵的遗传资源库，对棉花的遗传改良有着重大的现实和理论意义及潜在的应用价值。要开展亚洲棉原生质体培养和融合，首先要建立一套适合亚洲棉棉种体细胞胚胎发生和植株再生的实验体系，必须建立和优化亚洲棉的原生质体培养体系。本研究重点分析了亚洲棉体细胞培养和原生质体培养与融合各影响因素。本研究发现，体细胞培养中a-Naphthalene acetic acid 0.5 mg／L+Kinetin 0.1 mg／L激素组合是前期最适宜的诱导培养基，但没有得到亚洲棉的胚性愈伤。试验比较了影响亚洲棉原生质体分离的若干影响因素，预处理12-24 h、11％的甘露醇调节渗透压、酶液组成和浓度（纤维素酶1.5％、离析酶1％、半纤维素酶2％）、质壁分离的时间为3 h、酶解时间为14 h可以得到最高的原生质体产量和最好的质量。研究结果对建立高效的亚洲棉原生质体再生系统及其遗传操作有参考价值。对亚洲棉和戴维逊氏棉原生质体融合的研究结果表明，在交流场强100 V／cm、直流脉冲电场为1.25 kV／cm、脉冲幅宽为50μs、脉冲间隔为0.5 sec以及脉冲次数为3次的实验条件下，原生质体具有最高的融合频率和细胞活力。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 缩略语表
• 第一章 棉花组织培养研究进展
• 1.1 植物组织培养的概述
• 1.1.1 棉花组织培养及植株再生
• 1.1.1.1 体细胞培养与植株再生
• 1.1.1.2 花药培养
• 1.1.1.3 茎尖培养
• 1.1.1.4 胚珠和胚培养
• 1.1.2 影响体细胞胚发生和植株再生的因素
• 1.1.2.1 基因型
• 1.1.2.2 外植体
• 1.1.2.3 激素
• 1.1.2.4 培养条件
• 1.1.3 体细胞胚胎发生生理生化特性和遗传学分析
• 1.2 棉花原生质体培养研究发展
• 1.2.1 棉花原生质体培养操作
• 1.2.2 影响棉花原生质体再生的因素
• 1.2.2.1 分离原生质体的外植体
• 1.2.2.2 培养条件
• 1.2.3 棉花原生质体培养存在问题和解决方法
• 1.2.4 棉花的原生质体融合
• 1.2.5 体细胞杂种的鉴定
• 1.2.6 棉花原生质体培养及体细胞杂交的运用
• 1.2.6.1 原生质体是开展遗传理论研究的材料
• 1.2.6.2 原生质体的无性系变异
• 1.2.6.3 原生质体融合合成新种
• 1.2.6.4 转移抗逆性状,改良棉花品种
• 1.2.6.5 转移细胞质基因控制性状
• 第二章 亚洲棉体细胞胚胎发生研究
• 2.1 引言
• 2.2 材料与方法
• 2.2.1 试验材料
• 2.2.2 方法
• 2.2.2.1 种子灭菌、萌发和愈伤组织诱导
• 2.2.2.2 胚性愈伤组织诱导
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 愈伤组织诱导
• 2.3.2 胚性愈伤组织诱导
• 2.3.3 讨论
• 第三章 亚洲棉和戴维逊氏棉原生质体培养与融合
• 3.1 试验材料和方法
• 3.1.1 试验材料
• 3.1.2 试验方法
• 3.1.2.1 分离原生质体的酶液
• 3.1.2.2 原生质体的分离
• 3.1.2.3 原生质体活性的检测
• 3.1.2.4 原生质体产率计算
• 3.1.2.5 原生质体培养
• 3.1.2.6 原生质体融合
• 3.1.2.7 数据分析
• 3.2 结果与讨论
• 3.2.1 预处理对原生质体分离的影响
• 3.2.2 渗透压对原生质体分离效果的影响
• 3.2.3 质壁分离时间对原生质体分离的影响
• 3.2.4 酶液组成和浓度对亚洲棉原生质体活性和产量的影响
• 3.2.5 酶解时间对原生质体分离的影响
• 3.2.6 交流电场强度其作用时间对细胞融合的影响
• 3.2.7 直流脉冲电场强度和脉冲时间对原生质体融合的影响
• 3.2.8 脉冲次数对原生质体融合率的影响
• 3.3 讨论
• 参考文献
• 致谢