论文摘要
苎麻根为荨麻科苎麻属多年生草本植物苎麻（Boehmeria nivea（L.）Gaud）的干燥根及根茎。苎麻根甘寒,无毒,归心、肝、肾、膀胱经,有凉血、止血、散瘀之功效,临床上主要用于治疗创伤出血、咯血、尿血、肛门肿痛、乳痈、丹毒、脱肛不吸、赤白带下、妇人子宫炎,还治热病大渴、跌打损伤、蛇虫咬伤。以往有关苎麻根治疗乙型肝炎的报道不多,近年来苎麻根抗肝炎活性日益受到国内外学者的高度关注。台湾学者Kai-Ling Huang等研究发现在HepG2.2.15细胞乙型肝炎模型中,苎麻根提取物对乙肝e抗原（HBeAg）的分泌有抑制作用且呈剂量依赖性；台湾工业技术研究院从苎麻中提取得到代号为BMEC-101的提取物（含两种多酚）抗乙肝作用明显,已进入临床试验阶段；台湾绿益康生物科技公司利用转基因技术培育的新型苎麻开发的保健品,具有治疗肝病、清除自由基的效果。我院肝炎科临床使用也发现,苎麻根治疗乙肝疗效显著。本课题包括苎麻根的抗乙肝病毒活性研究和化学成分研究两部分,通过对活性筛选和化学成分的研究,寻找其特征性成分和活性成分,建立方便、快捷、准确的定性和定量方法,从而为制定客观、专属、科学的质量标准,为控制苎麻根药材的质量,保证中医临床用药安全、有效提供依据。首先,采用国际上通用的Hep G2.2.15细胞系乙肝病毒细胞模型,对苎麻根5个分离部位（苎麻根水洗脱部位、苎麻根40%乙醇洗脱部位、苎麻根70%乙醇洗脱部位、苎麻根水不溶部位和苎麻根总提取物）进行了活性筛选实验,采用酶联免疫法检测细胞上清中乙肝表面抗原（HBsAg）、e抗原（HBeAg）的分泌量,Real time PCR的方法检测细胞中乙型肝炎病毒DNA（HBV-DNA）,分别计算对病毒半数抑制浓度IC50及选择指数SI。方法成熟,结果可靠。实验结果表明5个供试品对Hep G2.2.15细胞培养液中HBsAg、HBeAg的分泌均没有明显的抑制作用；苎麻根水洗脱部位、苎麻根水不溶部位、苎麻根40%乙醇洗脱部位三个供试品抑制HBV-DNA复制的SI均大于2,分别为2.5、7.2、10.6,为有效低毒。以此实验的结果指导今后的工作,有目的地重点分离活性部位并建立活性成分的质量标准,为进一步开发抗乙肝新药提供依据。其次,对苎麻根药材乙醇提取物的化学成分进行了研究,应用现代色谱技术,采用多种分离方法,从中分离得到了29个化合物,并利用理化性质和现代波谱学方法鉴定了其中23个化合物,分别是7个三萜类化合物,1个芪类化合物,4个蒽醌类化合物,2个黄酮类化合物,3个甾醇类化合物,2个酚类化合物,2个倍半萜类化合物,1个有机酸类化合物和1个无机化合物。其中,2个为新化合物（1,7）,13个为首次从该植物中分离得到的化合物（（6、8、10、12、13、14、16、18-23））。化合物的结构如表1。7个三萜类化合物（1-7）依次分别为：3β,11α,19α-三羟基-12-烯-28-乌苏酸（3β,11α,19a-trihydroxyurs-12-en-28-oic acid）,常春藤皂苷元（hederagenin）,齐墩果酸（oleanolic acid）,熊果酸（ursolic acid）,坡模酸（pomolic acid）,3α,19α-二羟基-12-烯-28-乌苏酸（3a,19a-dihydroxyurs-12-en-28-oic acid）,19α-羟基乌苏-12-烯-3-氧-28-（19α-hydroxy-12-en-3-oxo-28-acid）1个芪类化合物为：白藜芦醇苷（polydatin） （8）4个蒽醌类化合物（9-12）分别为：大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（emodin-8-O-β-glucopyranoside）,大黄素甲醚（physcion）,大黄素（emodin）,1,2-二羟基-6-甲氧基-3-甲基-9,10-二酮-8 O-β-D-吡喃葡萄糖苷（1,2-dihydroxy-6-methoxy-3-methylanthracene-9,10-dione-8-O-β-glucopyranos ide）2个黄酮类化合物为：表儿茶素（epicatechin） （13）,儿茶素（catechin） （14）3个甾醇类化合物为：胡萝卜苷（Daucosterol） （15）,豆甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（Stigmasterol-3-O-β-D-glucopyranoside） （16）,β-谷甾醇（β-sitosterol） （17）2个酚类化合物为：3,4-二羟基苯甲酸乙酯（ethyl3,4-dihydroxybenzoate）（18）,对羟基苯甲酸乙酯（Ethylρ-hydroxybenzoate） （19）2个倍半萜类化合物为：3-氧-α-紫罗兰醇（C6差向异构体）（3-oxo-α-ionol （C6 Epimer）） （20,21）1个有机酸类化合物为9,10,11-Trihydroxy-（12Z）-12-octadecenoic acid（22）1个无机化合物为KNO3（23）另外6个尚未最终完全鉴定的成分中,初步推断有4个为糖脂,2个为黄酮。在化学成分研究的基础上,我们以苎麻根中分离得到的坡模酸作为对照品,建立了高效液相法测定苎麻根中坡模酸含量方法。测定条件：色谱柱为Restek C18色谱柱（4.6mm×250mm,5μm）,流动相为甲醇-0.5%磷酸水（70：30）,流速1ml·min-1,检测波长210nm；柱温25℃。通过对精密度、稳定性、重现性、回收率等方法学考察,结果显示,该方法准确、灵敏、简单、快捷,为定量控制中药苎麻根质量和进一步制定科学规范的药材标准提供了参考依据。同时从苎麻根中分得的长春藤皂苷元、齐墩果酸、熊果酸、坡模酸、3a,19α-二羟基-12-烯-28-乌苏酸等作为对照品对苎麻根药材进行薄层鉴别的实验研究,通过进行薄层色谱条件的优化,最终确定了以乙醚100ml超声处理30分钟作为供试品的制备方法,薄层条件使用硅胶GF254薄层板,正己烷-丙酮（3：1）为展开剂,用对照品与本品进行比较,以10%硫酸乙醇溶液显色。供试品色谱中,在与对照品色谱相应位置上,可观察到相同的紫红色斑点。该方法简便、快速、重现性好、结果可靠。从而为鉴别苎麻根药材的真伪提供了更加快速、准确的方法。