论文摘要
目的:用分子对接技术预测HIV融合抑制剂是否能对SARS起作用;原核表达SARS S蛋白S2结构域,制备抗S2的多克隆抗体。方法:搜寻HIV gp41融合抑制剂,用DOCK软件分析其与SARS S2结构域HR1三聚体晶体结构的亲和力;用PCR技术得到S2结构域编码序列,亚克隆至原核表达载体pGEX-5X-3,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达融合蛋白。所得S2融合蛋白经电泳后KCl染色割胶,免疫家兔制备多抗,分离血清并用琼脂糖双向扩散实验测定抗体效价。结果:预测了23个小分子,ADS-J1、ADS-J2、XTT Formazan等几个小分子得分较高,提示有亲和力。构建了pGEX-5X-3-S2原核表达载体,SDS-PAGE电泳显示诱导出84.2KD融合蛋白。融合蛋白免疫家兔,琼脂糖双向扩散实验证实血清有一定的抗体效价。结论:发现抗HIV的融合抑制剂确能对SARS起作用。成功表达了S2结构域,并制备了抗S2结构域的多克隆抗体。
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