论文摘要
本试验从河南省某些发病猪场分别分离到一株猪伪狂犬病病毒（PRV）和一株猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）,并对其特性进行了相应的鉴定。利用自行分离的PRY和PRRSV加入免疫增强剂和弗氏佐剂作为混合免疫抗原,免疫8-12周龄Balb/c小鼠后,采用一次融合、分别筛选的方法,获得了能分别稳定分泌抗2种抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株。其中获得2株稳定分泌抗PRV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为7F5、7G3,获得3株稳定分泌抗PRRSV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2D5、2D9、1F7。同时,分别用纯化的PRV和PRRSV加入免疫增强剂和佐剂作为单一免疫抗原,采用传统杂交瘤细胞融合技术,最后从单一PRV免疫组获得1株稳定分泌抗PRV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为6E11;从单一PRRSV免疫组获得1株稳定分泌抗PRRSV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为3E2。分泌抗PRV的单克隆抗体与PPV、PRRSV、LPS、AIV、NDV、PRRSV无交叉反应;分泌抗PRRSV的单克隆抗体与PPV、PRV、LPS、AIV、NDV、PRRSV无交叉反应;表明所筛选的杂交瘤细胞株特异性较高。分泌抗PRV单克隆抗体的杂交瘤细胞株的细胞上清和小鼠腹水单抗效价均值分别达到1:1600、1:51200以上;分泌抗PRRSV单克隆抗体的杂交瘤细胞株的细胞上清和小鼠腹水单抗效价均值分别达到1:1600、1:51200以上。这两种杂交瘤细胞株传代25次和经3次冻存复苏后,仍能较稳定分泌抗体。另外,本试验还对所获得的杂交瘤细胞株的染色体数目（平均数目在96-106之间）和单克隆抗体亚型（均为IgG类抗体分子）以及单克隆抗体的中和活性等特性进行了相应的鉴定。这两种单克隆抗体的获得为进一步研制PRV和PRRSV相关诊断试剂及其试剂盒奠定了基础。与用单一纯化抗原免疫小鼠的传统方法相比,本研究所建立的两种抗原混合免疫、分别筛选的方法,仅同时免疫、一次融合就可分别筛选出分泌抗2种抗原单克隆抗体的两种杂交瘤细胞株,且分泌抗体效价与抗原单独免疫融合所产生的单克隆抗体效价相似,同样特异且稳定。所以说本试验所建立的两种抗原同时免疫、一次融合、分别筛选的方法是一种建立杂交瘤细胞株的高效方法,不但节约了实验材料,降低了成本,而且节省了时间和人力,大大提高了建立杂交瘤细胞株的工作效率。原来需要两个人或更多人才能完成的工作,现在一个人就可以完成。本研究方法的建立在单克隆抗体杂交瘤细胞传统生产技术上的一次大胆尝试和新的突破。这对于杂交瘤技术的学术研究和实际应用均具有重要意义。本试验还建立了抗PRRSV单抗介导的双夹心ELISA检测PRRSV的实验方法,利用此方法可以用来检测病料组织及细胞培养物中的PRRSV。但该方法不能区分强毒株和疫苗毒。尽管如此,该方法对于PRRSV非免疫发病猪群、疫苗毒或强毒培养物等的检测仍具有重要参考价值。
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标签：混合免疫论文; 一次融合论文; 分别筛选论文; 杂交瘤细胞株论文; 单克隆抗体论文; 双夹心论文; 病毒检测论文;