小球藻提取物对四氯化碳所致大鼠急性肝损伤解毒机制的研究

论文摘要

本研究旨在考察小球藻水提取物（以下简称为CA）对CCl4所致大鼠急性肝损伤的保护作用及解毒作用的机制。本文采用AOAC规定的方法对CA中营养成分进行分析,结果表明,CA中含有高蛋白质（52.46%）,高碳水化合物（36.27%）,低脂肪（0.12%）。采用分光光度法对CA抗氧化活性进行测定,测定结果显示,CA中总多酚类物质含量为22.94±1.82 mg·g-1（n=3）,DPPH·自由基清除反应EC50为20.08 mg·mL-1（n=3）。本文采用高效液相色谱法测定小球藻提取物中叶黄素含量,以Zorbax EclipseXDB-C18（150×4.6 mm i.d.,3.5μm）为固定相,甲醇-乙腈-水为流动相,利用梯度洗脱程序测定了CA中叶黄素的含量,检测波长446 nm,流速0.8mL·min-1,柱温室温。结果表明,叶黄素在5.0～50.0μg·mL-1的范围内,峰面积与浓度线性关系良好,A=2.362×105C-1.256×103（r=0.9999,n=6）,方法的平均回收率为98.7%（RSD=1.4%,n=9）。急性毒性试验中,雌雄各半的ICR小鼠40只,随机分为4个剂量组,灌胃给药后,经7天观察,未见明显不良反应,也无一例死亡。急性毒性试验结果表明,CA的LD50＞10 g·kg-1,按急性毒性分级,其应属实际无毒物质。CA对CCl4所致大鼠急性肝损伤保护作用研究中,将60只受试大鼠随机分为溶媒对照组、模型对照组、高剂量组、中剂量组、低剂量组和阳性对照组6个组,给药组(10,5,2.5 g·kg-1),阳性对照组(0.3 g·kg-1水飞蓟素)灌胃,溶媒对照组、模型对照组按等体积溶剂灌胃,连续给药30天,给药第27天、第30天,除溶媒对照组给予等体积玉米油溶液外,其它各组均皮下给予CCl4油剂（50%CCl4玉米油溶液）2mL·kg-1。观察CA对CCl4所致急性肝损伤大鼠的肝功能、肝组织过氧化指标、肝解毒各阶段指标以及肝病理学的影响。实验结果表明,CA各给药组大鼠血清中ALT、AST、ALP、TC、TG、TL较模型组明显改善（P＜0.05或P＜0.01）,肝组织中MDA、Ca2+含量显著降低（P＜0.05或P＜0.01）,SOD、GSH-Px活性显著增强（P＜0.05或P＜0.01）。CYP450含量降低（P＜0.05或P＜0.01）,CPR活性显著降低（P＜0.05）,CYP2E1表达减弱,GSH含量明显恢复（P＜0.05）,GST活性显著增强（P＜0.05）。HE染色结果表明,给药高、中、低剂量组与模型组比较,肝组织损伤均有不同程度的减轻,灶状、坏死灶减少,范围减小,浊肿、气球样变及间质炎症减轻,其中高剂量组较中、低剂量组效果好。采用MTT法考察了CA对人肝癌HepG2细胞的作用。结果表明,CA对HepG2细胞体外增殖具有明显的抑制作用。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 前言
• 1.1 肝脏的解毒过程
• 1.2 肝损伤的机制
• 1.3 四氯化碳引起的肝损伤
• 1.4 保肝药物的研究与开发
• 1.5 小球藻
• 1.6 叶黄素
• 1.7 立题目的
• 第二章 CA的制备及分析
• 2.1 实验材料
• 2.2 CA的制备
• 2.3 CA营养成分分析
• 2.4 CA抗氧化活性测定
• 2.5 CA中叶黄素含量测定
• 2.6 讨论
• 第三章 CA急性毒性试验
• 3.1 实验材料
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 Horn's法
• 3.2.2 动物分组及处理
• 3.3 实验结果
• 4所致大鼠急性肝损伤的保护作用'>第四章 CA对CCl₄所致大鼠急性肝损伤的保护作用
• 4.1 实验材料
• 4.2 实验方法
• 4.2.1 动物模型的建立
• 4.2.2 血清生化指标测定
• 4.2.3 肝组织生化指标测定
• 4.2.4 病理学指标检测
• 4.2.5 数据处理及统计方法
• 4.3 实验结果
• 4.4 讨论
• 第五章 CA对HepG2细胞体外增殖抑制作用
• 5.1 实验材料
• 5.2 实验方法
• 5.2.1 MTT法的基本原理
• 5.2.2 HepG2细胞体外培养
• 5.2.3 CA对HepG2细胞增殖的影响
• 5.3 实验结果
• 第六章 结论
• 附录
• 参考文献
• 发表文章目录
• 致谢