论文摘要
目的对微载体贴附悬浮共培养的原代大鼠肝细胞的生物学功能进行评价,探讨微载体贴附悬浮共培养对原代肝细胞功能特性的影响。方法应用半原位胶原酶灌注法分离获得原代大鼠肝细胞,与肝星状细胞株rHSC-99加入含cytodex-3的DMEM培养液中混合共培养,定期检测肝功能指标,并动态观察肝细胞形态变化。结果各培养组的细胞量、肝细胞的白蛋白及尿素合成量、安定转化量在培养过程中均为先升高后逐渐下降,第4天最高;培养第4天起,微载体共培养组（D组）活细胞量高于单层共培养组（B组）,微载体单培养组（C组）高于单层单培养组（A组）,差异有统计学意义（p<0.05）;蛋白及尿素合成量、安定转化量,在培养第4～8天,D组高于B、C两组,差异有统计学意义（p<0.05）;培养第4天起,A组白蛋白及尿素合成量、安定转化量均低于B组、C组、D组,差异有统计学意义（p<0.05）;培养第4天细胞总RNA丰度各组均较高,且D组高于B组,C组高于A组,差异有统计学意义（p<0.05）。光镜下见肝细胞正常形态A组维持时间1约0天,B、C、D三组可维持2W以上,D组部分肝细胞可达3W以上。结论肝星状细胞与肝细胞微载体贴附悬浮共培养,较肝细胞微载体单独培养、肝细胞单层共培养能进一步提高肝细胞的功能表达、延长细胞生长时间。肝星状细胞与肝细胞微载体共培养,可以做为一个较为理想的体外肝细胞培养模式。
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