论文题目: 禽源H3、H4亚型流感病毒的序列分析及对鸡的致病性研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 基础兽医学
作者: 杨彩然
导师: 马学恩,陈化兰,赵振华
关键词: 亚型,禽流感病毒,序列分析,致病性
文献来源: 内蒙古农业大学
发表年度: 2005
论文摘要: 本论文对来自中国安徽、福建、浙江、江苏省的 14 株鸭源和来自中国四川的 2株鸡源的禽流感病毒(AIV)分离株进行了亚型鉴定、全基因序列测定和分析,从中挑选出 8 个毒株用于鸡的致病性试验研究。 16 株禽流感病毒的序列分析:经亚型鉴定,确认 16 株流感病毒中,12 株为 H3亚型流感病毒,其中 1 株 H3N2 亚型, 1 株 H3N6 亚型,10 株 H3N1 亚型;4 株为 H4N6亚型。通过提取病毒的核酸、设计特异性引物,用 RT-PCR 方法扩增所有毒株的各个基因片段、克隆到 pMD18-T 载体、测序、拼接序列等一系列步骤,最后绘制进化树。 H3 亚型 HA1 基因进化分析结果:本研究 10 个 H3N1 亚型分离株和 1 个 H3N2 亚型分离株聚成一支,它们与 1963 年乌克兰病毒分离株 A/Duck/Ukraine/1/63(H3N8)同源率最高,达 87.7%～88.7%;分离株 DK/SZH/1/02(H3N6)另成一支,其与 A/Aquartic Bird/Hong Kong/399/99 (H3N8) 同源率最高,达 95.4%。两分支间同源率为 86.6%～87.5%。 10 个 H3N1 亚型流感病毒分离株的 N1 基因形成一个独立的小分支,它们之间同源率达 98.7%～100%,与基因库中的 Env/HK/437-6/99(H5N1) 同源率最高,在93.3%～93.8%之间。DK/AH/271/02(H3N2)毒株的 N2 基因与基因库中的A/Ostrich/South Africa/9508103/95 (H9N2)的同源率最高,达 94.3%。 12 个 H3 亚型毒株的 NP 基因中,DK/AH/271/02(H3N2)、 DK/SZH/1/02(H3N6)与 AQUB/HK/399/99(H3N8)、DK/GD/40/00(H5N1)聚在一起,两个分离株 DK/AH/271/02(H3N2)与 DK/SZH/1/02(H3N6)的 NP 基因同源率为 96.1%,其余 10 个 H3N1 亚型的NP 基因与 SW/Fujian/1/03(H5N1)的形成一小分支,此小分支的 H3N1 亚型分离株之间 NP 基因同源率为 96.6%～100%。 H3 亚型分离株 M 基因分为两个分支,其 中 DK/YZH/314/03(H3N1)、DK/YZH/341/03(H3N1) 、 DK/SZH/1/02(H3N6) 聚 成 一 支 , 它 们 与WDk/ST/1737/00(H6N8)的 M1 基因核苷酸的同源率最高;其余分离株另成一支,它们与 DK/Primorie/2633/01(H5N3)的 M1 基因核苷酸的同源率最高。两支分离株之间,M1 基因的同源率为 93.3%～94.9% H3 分离株的 NS 基因分为 A 和 B 两组,本研究的 DK/YZH/314/03(H3N1)、DK/YZH/341/03(H3N1)、和 DK/SZH/1/02(H3N6) 分离株属于 B 组,而其它分离株归 A组。 H3 亚型分离株的 PB2 基因分为 4 个小支。DK/SZH/1/02 为一支,DK/AH/271/02为另一支,DK/YZH/314/03 和 DK/YZH/341/03 在一起,其余 H3N1 分离株为一支。后两支间的同源率仅为 87.9%～88.3%。
论文目录:
1 引言
1.1 流感病毒的研究进展
1.1.1 流感的历史
1.1.2 禽流感的历史
1.1.3 禽流感的研究进展
1.2 流感病毒分子生物学特性
1.2.1 流感病毒的基因和编码蛋白
1.2.2 流感病毒宿主特异性的分子生物学基础
1.2.3 流感病毒致病性的分子基础
1.3 本研究的目的
2 试验一 H3、H4 亚型流感病毒基因的序列分析
2.1 材料
2.1.1 病毒
2.1.2 主要试剂
2.1.3 引物
2.2 方法
2.2.1 病毒亚型的鉴定
2.2.2 病毒核酸的提取
2.2.3 cDNA 合成
2.2.4 聚合酶链式反应（PCR）
2.2.5 琼脂糖凝胶电泳鉴定 PCR 产物
2.2.6 PCR 产物回收和纯化
2.2.7 大肠杆菌感受态细胞的制备
2.2.8 目的基因 DNA 产物的连接与转化
2.2.9 阳性重组质粒的筛选
2.2.10 酚-氯仿-高真空绝缘硅脂粗提质粒
2.2.11 质粒 DNA 纯化
2.2.12 重组质粒的 PCR 鉴定
2.2.13 琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR 产物
2.2.14 质粒 DNA 测序
2.2.15 序列分析
2.3 结果与分析
2.3.1 PCR 产物鉴定
2.3.2 序列测定结果
2.3.3 序列分析
2.4 讨论
2.5 结论
3 试验二 H3、H4 亚型禽流感病毒对鸡的致病性试验
3.1 材料
3.1.1 病毒
3.1.2 SPF 鸡和鸡胚
3.2 方法
3.2.1 病毒的鸡胚半数感染量（EID50）的测定
3.2.2 病毒对鸡的静脉接种致病指数(IVPI)的测定
3.2.3 血清尿酸测定
3.2.4 试验设计
3.3 结果
3.3.1 病毒EID50测定结果（见表2-7）
3.3.2 静脉致病指数（IVPI）测定结果
3.3.3 临床观察和血清学结果
3.3.4 鸡感染试验结果
3.4 讨论
3.5 结论
致谢
参考文献
附录
发布时间: 2005-07-18
参考文献
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