芹菜素对Con A诱导的免疫性肝炎模型小鼠的保护作用

论文摘要

目的:研究芹菜素对T细胞和RAW264.7细胞生物学行为的影响作用,以及其对自身免疫性肝炎模型小鼠的治疗效果,为新型免疫抑制药物的开发奠定理论基础。方法:利用荧光标志抗体双染色、CFDA-SE染色、PI染色和Annexin V-FITC/PI双染色结合流式细胞术检测芹菜素对多克隆刺激剂刀豆蛋白A（ConA）诱导的T细胞活化、增殖、细胞周期和地塞米松（DEX）诱导的T细胞凋亡的影响;利用MTT法、Griess试剂盒检测法和荧光微球检测法检测芹菜素对LPS刺激的RAW264.7细胞增殖、NO分泌和吞噬功能的影响;以外周血丙氨酸氨基转移酶（ALT）和肝脏石蜡切片为指标建立稳定的自身免疫性肝炎小鼠模型,并以上2个指标摸索芹菜素对自身免疫性肝炎模型小鼠的治疗效果;利用尾静脉注射CFDA-SE染色的T细胞检测芹菜素对体内T细胞增殖的影响。结果:芹菜素（25～200μmol/L）显著抑制Con A诱导的T细胞表达CD69、CD25和CD71,同时显著性抑制T细胞的增殖,使细胞周期阻滞于G0/G1期,并明显抑制T细胞凋亡（P＜0.01）,且呈剂量依赖关系。芹菜素（25～200μmol/L）显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞的增殖、NO分泌和吞噬功能（P＜0.01）,且呈剂量依赖关系。一次性尾静脉注射20mg/Kg Con A,2 h ALT开始升高,8 h达到峰值,显著性高于正常范围（P＜0.01）。肝脏石蜡切片显示,随着时间的延长,肝细胞的坏死程度和炎症细胞的浸润程度逐渐严重,8 h最为显著,并与Control组具有统计学差异（P＜0.01）。腹腔注射8次50 mg/Kg芹菜素,ALT均大于正常值;腹腔注射6～8次100 mg/Kg芹菜素,ALT小于正常值,显著性小于Con A组（P＜0.01）,与CsA组无统计学意义（P＞0.05）;腹腔注射4～6次200 mg/Kg芹菜素,ALT小于正常值,显著性小于Con A组（P＜0.01）,与CsA组无统计学意义（P＞0.05）。在各浓度芹菜素治疗组中,随着ALT的降低,肝细胞的坏死程度和炎症细胞的浸润程度相应地减轻,与CsA组无统计学意义（P＞0.05）。48 h,Control组流式图只有一个亲代峰,体内T细胞不增殖;Con A组流式图呈现4个子代峰,体内T细胞分裂4代,与Control组具有统计学意义（P＜0.01）;CsA显著性抑制Con A诱导的体内T细胞增殖（P＜0.01）,流式图仅呈现一个小的子代峰;100 mg/Kg和200 mg/Kg芹菜素组流式图呈现2～3个子代峰,与Con A组具有统计学意义（P＜0.01）。结论:芹菜素不但能够抑制ConA诱导的T细胞体外活化、增殖和凋亡,阻滞细胞周期于G0/G1期,并同时抑制LPS刺激的RAW264.7细胞的增殖、NO分泌和吞噬功能,从而暗示了芹菜素对适应性免疫应答和固有性免疫应答具有抑制作用。此外,芹菜素能够治疗Con A诱导的模型小鼠自身免疫性肝炎疾病,并同时抑制T细胞体内增殖,但效果无CsA显著。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 目录
• 前言
• 第一部分 芹菜素对多克隆刺激剂ConA诱导的小鼠T细胞和RAW264.7细胞体外细胞行为的影响
• 1.引言
• 2.材料与方法
• 3.结果
• 4.讨论
• 5.小结
• 6.参考文献
• 第二部分 芹菜素对Con A介导的肝损伤的治疗效果
• 1.引言
• 2.材料与方法
• 3.结果
• 4.讨论
• 5.小结
• 6.参考文献
• 总结与建议
• 创新点
• 发表论文
• 致谢
• 英文缩略表