‘突尼斯软籽’石榴再生体系和GFP报告基因的瞬时表达研究初报

论文摘要

以‘突尼斯软籽’石榴叶片和茎段为外植体,探讨了‘突尼斯软籽’石榴叶片和茎段的再生体系、不同浓度抗生素对外植体的影响以及GFP报告基因的瞬时表达体系。研究结果如下:1.建立了‘突尼斯软籽’石榴叶片再生体系。研究结果表明:从人工气候室采摘的离体叶片用0.1% HgCl2灭菌4min效果最好;叶片分化愈伤组织的最佳培养基为MS+BA1.0mg/L+ NAA0.3mg/L;诱导不定芽的最佳的培养基为MS+NAA0.3mg/L+TDZ1.5mg/L+KT1.0mg/L;不定芽抽生成茎段,效果最好的培养基为MS+NAA1.0mg/L+BA0.2mg/L+KT1.0mg/L;生根培养基为MS+1/2NAA0.5mg/L,其根系较粗壮,生根移栽后的成活率可达85%。2.建立了‘突尼斯软籽’石榴茎段再生体系。研究结果表明:从人工气候室采摘的离体茎段用0.1% HgCl2灭菌3min效果最好;茎段分化愈伤组织的最佳培养基为MS+ NAA 0.1 mg/L + TDZ 1.0mg/L ;愈伤组织分化不定芽的最佳培养基为MS+NAA0.2mg/L+TDZ1.0mg/L+KT1.0mg/L ;不定芽抽生茎段,效果最优的培养基为MS+NAA0.2mg/L+KT1.0mg/L;之后将这些茎段放入生根培养基MS+1/2NAA0.5mg/L后,产生比较粗壮的根系,生根之后移栽即可成活,成活率可达85%以上。3.比较了两种‘突尼斯软籽’石榴再生体系的优越性。研究结果表明:综合各种因素,叶片再生效果比茎段效果更佳。4.筛选了‘突尼斯软籽’石榴外植体对聚乙烯吡咯烷酮的浓度。研究结果表明:聚乙烯吡咯烷酮（PVP）浓度为1.0g/L时效果最佳。5.筛选了‘突尼斯软籽’石榴抗生素的浓度。研究结果表明:卡那霉素（Kan）的浓度为50mg/L时,愈伤组织受到明显抑制,可以用来筛选转基因材料;头孢霉素（Cef）的浓度为500mg/L时,可以有效抑制菌株的生长。6.初步研究了GFP报告基因的瞬时表达情况。但结果表明:转化材料与对照均发出绿色荧光,两者差异不明显。

论文目录

• 致谢
• 摘要
• 1 文献综述
• 1.1 石榴栽培现状
• 1.1.1 石榴概况
• 1.1.1.1 石榴的保健价值
• 1.1.1.2 石榴的药理学研究进展
• 1.1.1.3 综合开发与利用研究
• 1.1.2 石榴的地域分布
• 1.1.3 石榴主要品种
• 1.1.4 河南省石榴的生产与栽培现状
• 1.1.5 石榴生产与栽培中存在的问题
• 1.1.5.1 石榴的苗木繁育
• 1.1.5.2 品种优化
• 1.1.5.3 育苗体系的建立
• 1.1.5.4 自然灾害
• 1.2 组培现状
• 1.2.1 组培的目的及意义
• 1.2.1.1 快速繁殖优良种苗
• 1.2.1.2 无病毒苗的培养
• 1.2.1.3 在育种上的应用
• 1.2.1.4 利用组织培养可以有效地开展生物遗传转化体系的研究
• 1.2.1.5 工厂化育苗
• 1.2.2 组织培养在果树生产中的应用
• 1.2.2.1 胚培养
• 1.2.2.2 叶片离体培养
• 1.2.2.3 茎段培养
• 1.3 报告基因GFP 转化现状
• 1.3.1 GFP 基因的简介
• 1.3.2 GFP 基因的应用现状
• 1.3.2.1 GFP 作为基因表达载体及重组病毒（ 细菌） 的报告基因
• 1.3.2.2 GFP 用于开发转基因彩色品种
• 1.3.2.3 GFP 可以作为体内宿主与病原体相互作用的标记物
• 1.3.2.4 GFP 基因可以提高转基因产物的利用率
• 1.3.2.5 GFP 在临床诊断和基因治疗研究中的应用
• 1.3.2.6 GFP 用于转基因安全与生物防治
• 1.3.3 GFP 基因检测中的问题
• 1.4 报告基因瞬时表达体系建立
• 2 引言
• 3 材料与方法
• 3.1 试验材料
• 3.1.1 转化受体材料
• 3.1.2 菌株与质粒
• 3.1.3 培养基配方
• 3.1.4 主要生化试剂
• 3.2 试验方法
• 3.2.1‘突尼斯软籽’石榴叶片再生体系的建立
• 3.2.1.1 扦插苗和无菌苗的培养
• 3.2.1.2 叶片接种与培养
• 3.2.1.3 不定芽的培养
• 3.2.1.4 不定芽抽生茎段的培养
• 3.2.1.5 再生植株生根成苗和移栽
• 3.2.2 ‘突尼斯软籽’石榴茎段再生体系的建立
• 3.2.2.1 扦插苗和无菌苗的培养
• 3.2.2.2 灭菌方法
• 3.2.2.3 茎段接种与愈伤培养
• 3.2.2.4 不定芽的诱导
• 3.2.2.5 不定芽抽生茎段的培养
• 3.2.2.6 再生植株生根成苗和移栽
• 3.2.3 抗褐化剂处理
• 3.2.3.1 抗褐化剂的不同处理
• 3.2.3.2 实验结果观察与统计方法
• 3.2.4 转化受体对抗生素敏感性实验
• 3.2.4.1 转化受体对卡那霉素敏感性试验
• 3.2.4.2 转化受体对头孢霉素敏感性试验
• 3.2.5 GFP 报告基因的转化
• 3.2.5.1 农杆菌培养和活化
• 3.2.5.2 浸染方式
• 3.2.5.3 共培养
• 3.2.5.4 筛选培养
• 3.2.5.5 遗传转化流程图
• 3.2.6 根癌农杆菌介导的石榴遗传转化
• 3.2.7 GFP 荧光检测
• 4. 结果与分析
• 4.1‘突尼斯软籽石榴’叶片再生体系的建立
• 4.1.1 叶片再生愈伤组织
• 4.1.1.1 不同灭菌时间对叶片灭菌效果的影响
• 4.1.1.2 不同激素配比对叶片再生愈伤组织的影响
• 4.1.1.3 不同激素配比对叶片再生不定芽的影响
• 4.1.2 不同激素配比对愈伤再生不定芽的影响
• 4.1.3 不同激素配比对不定芽抽生茎段的影响
• 4.1.4 生根移栽
• 4.2‘突尼斯软籽石榴’茎段再生体系的建立
• 4.2.1 茎段再生愈伤组织
• 4.2.1.1 不同灭菌时间对茎段的影响
• 4.2.1.2 不同激素配比对茎段愈伤组织的影响
• 4.2.2 不同激素配比对不定芽的再生的影响
• 4.2.3 不同激素配比对不定芽抽生愈伤组织的影响
• 4.2.4 生根移栽
• 4.3 两种再生体系的比较
• 4.4 抗褐化剂处理
• 4.5 转化受体材料对抗生素的敏感性
• 4.5.1 转化受体材料对卡那霉素的敏感性
• 4.5.2 转化受体材料对头孢霉素的敏感性
• 4.6 GFP 报告基因的瞬时表达体系初建
• 4.6.1 菌液浓度对GFP 基因瞬时表达的影响
• 4.6.2 浸染时间对GFP 基因瞬时表达的影响
• 4.6.3 共培养时间对 GFP 基因瞬时表达的影响
• 5 结论与讨论
• 5.1 结论
• 5.2 讨论
• 参考文献
• ABSTRACT
• 附图说明