RNA干扰技术对A549细胞表皮生长因子受体（EGFR）基因抑制作用的实验研究

论文摘要

目的:利用RNA干扰技术,观察携带表皮生长因子受体（EGFR）同源基因的重组质粒稳定转染非小细胞肺癌（NSCLC）细胞株A549细胞后对细胞表皮生长因子受体mRNA和蛋白质表达水平变化的影响;同时筛选出干扰效果较好的重组质粒,为进一步研究稳定转染后的单克隆细胞生物学特性做好准备。方法:根据RNA干扰原理,体外设计并合成4条靶向EGFR特异性干扰片段,即h-EGFR1、h-EGFR2、h-EGFR3、h-EGFR4,以pGensil-1为载体,分别构建重组质粒pGensil-1-EGFR-1、pGensil-1-EGFR-2、pGensil-1-EGFR-3、pGensil-1-EGFR-4。分别以Lipofectamine 2000介导转染肺腺癌细胞株A549细胞,经G418筛选后挑选出稳定转染的单克隆细胞。将所挑选出的单克隆细胞大量培养后采用RT-PCR和Western blot技术分别检测EGFR基因mRNA的转录及EGFR基因蛋白质翻译水平,并计算抑制率。结果:在挑选出稳定表达的单克隆细胞后,实验组pGensil-1-EGFR-1与未转染组相比EGFR表达水平无明显降低（P>0.05）,实验组pGensil-1-EGFR-2、pGensil-1-EGFR-3、pGensil-1-EGFR-4与未转染组相比EGFR基因mRNA和蛋白质的表达水平均有明显降低（P<0.05）,mRNA水平干扰效率分别为27.6%,45.8%,51.7%,pGensil-1-EGFR-2组与pGensil-1-EGFR-4组相比有统计学意义（P<0.05）, pGensil-1-EGFR-3组与pGensil-1-EGFR-4组间比较二者无统计学意义（P>0.05）。蛋白质水平干扰效率分别为34.25%,50.86%,47.07%,且这三组间比较无统计学意义（P>0.05）。空白对照组及阴性对照组与未转染组相比EGFR基因mRNA和蛋白质的表达水平无明显差异（P>0.05）。结论:利用RNA干扰技术,将4个携带表皮生长因子受体同源mRNA的重组质粒稳定转染至肺腺癌细胞A549后,其中3个能有效抑制A549细胞EGFR mRNA及EGFR蛋白质的表达,提示RNA干扰技术能影响A549细胞中EGFR基因的功能;同时本实验也筛选干扰效果较好pGensil-1-EGFR-3组与pGensil-1-EGFR-4组两个实验组,为进一步研究携带表皮生长因子受体同源mRNA的重组质粒稳定转染至肺腺癌细胞A549细胞后对A549细胞生物学影响做好准备。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 致谢
• 附图
• 参考文献
• 综述
• 攻读学位期间的研究成果