论文摘要
背景与目的N K细胞是淋巴细胞中的一类特殊杀伤细胞,其杀伤活性的启动既不需抗原刺激,亦不需抗体参与,具有排斥异己细胞的作用。NK细胞对靶细胞的杀伤作用,受其表面的激活性受体和抑制性受体之间平衡的调节。其中NKG2D传导活化信号,配体包括MICA/MICB,ULBP1-3分子;KIR传导抑制信号,其配体为HLA-I类分子。移植的组织器官是否表达异体NK细胞KIR不能识别的HLA分子,会影响NK细胞对组织细胞的杀伤活性。同种异体NK细胞对靶细胞杀伤与骨髓移植中的肝静脉血管闭塞病（veno-occlusive disease of the liver VOD）及器官移植排斥反应有关系。血管内皮细胞是供受体循环细胞之间的第一道屏障。循环的宿主淋巴细胞可直接识别异种血管内皮细胞而发动免疫攻击,或与移植物抗原及血管内皮上的抗原递呈细胞相互作用,损伤内皮细胞,从而使移植物血液循环障碍,最终导致移植物被排斥,移植失败。本研究以人脐静脉内皮细胞系做为靶细胞,探讨同种异体NK细胞对内皮细胞是否有杀伤作用,如果有杀伤,再进一步研究参与杀伤的活化性及抑制性信号系统的分子机制。方法第一章检测ECV304细胞HLA-A、B、Cw分型及NKG2D配体MICA/B、ULBP1-3在基因水平的表达以QIAampDNA抽提试剂提取ECV304细胞的DNA;ECV304细胞HLA分型采用序列特异性引物扩增法（sequence specific primer polymerase chainreproduction,PCR-SSP）,RT-PCR检测ECV304细胞NKG2D的配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3的表达情况。第二章检测不同个体NK细胞KIR2DL1的表达及ECV304细胞、K562细胞NKG2D配体MICA/B、ULBP1-3表达率、HLA-Ⅰ类分子表达率通过PCR-SSP法及流式细胞仪分别检测8例健康者基因及外周血细胞表面KIR2DL1类分子的表达,用流式细胞仪检测ECV304细胞NKG2D的配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3及HLA-Ⅰ类分子的表达情况。用流式细胞仪检测半数抑制浓度（50%inhibitory concentration,IC50）浓度的环孢素A（cyclosporinA,CSA）及2ug/ml内毒素（Lipopolysaccharide,LPS）作用24小时后的ECV304细胞NKG2D配体的表达率是否有变化。第三章分离外周血NK细胞、LDH释放法测定NK细胞在效靶比20:1时对ECV304细胞的杀伤活性及anti-KIR2DL1mAb对NK细胞杀伤活性的影响免疫磁珠法分离纯化8例健康者的NK细胞。自8例健康供者分离外周血NK细胞,流式细胞仪检测KIR2DL1的表达率,LDH释放法测定NK细胞在效靶比20:1时对ECV304细胞、K562细胞的杀伤活性及anti-KIR2DL1mAb对NK细胞杀伤活性的影响。结果第一章检测ECV304细胞HLA-A、B、Cw分型及NKG2D配体MICA/B、ULBP1-3在基因水平的表达1.ECV304细胞HLA基因型:PCR-SSP法检测ECV304细胞HLA-A,B,Cw基因型为A1,-;B18,-;Cw5,-。2.RT-PCR检测ECV304细胞NKG2D配体的表达:RT-PCR检测结果显示,ECV304细胞在mRNA均表达NKG2D的配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3。第二章检测不同个体外周血细胞KIR2DL1的表达ECV304细胞、K562细胞NKG2D配体MICA/B、ULBP1-3表达率、HLA-Ⅰ类分子表达率1.不同个体检测KIR2DL1的表达率:HLA分型表明,ECV304表达KIR2DL1的配体,而不表达KIR2DL2/3、KIR3DL1的配体。PCR-SSP法检测结果显示,8例健康者在基因水平均表达KIR2DL1,并且NK细胞表面KIR2DL1表达率有较大差异,从6.2%-46.2%不等。KIR2DL2/3、KIR3DL1与ECV304细胞表面相应的HLA-A、B类分子间存在错配现象。2.流式细胞仪检测结果表明ECV304细胞表面不表达NKG2D配体MICA/B、ULBP1-3,HLA-Ⅰ分子表达率为97.5%。3.流式细胞仪检测结果显示1.63ug/ml CSA及2ug/mlLPS作用24小时后的ECV304细胞表面不表达NKG2D的配体MICA、MICB、ULBP1-3。4.K562细胞表面MICA/B、ULBP1、ULBP2、ULBP3的表达率分别为61.5%、34.4%、36.7%、21.8%,不表达HLA-Ⅰ类分子。第三章分离外周血NK细胞、LDH释放法测定NK细胞在效靶比20:1时对ECV304细胞的杀伤活性及anti-KIR2DL1mAb对NK细胞杀伤活性的影响流式细胞仪检测CD3-CD16+CD56+细胞的纯度大于90.0%。8例健康供者NK细胞KIR2DL1表达率有较大差异,对ECV304细胞的杀伤活性也有不同,（效靶比20:1）KIR2DL1表达率为6.2%-46.2%时,NK细胞对ECV304细胞的杀伤活性分别为1.2%-28.0%;anti-KIR2DL1 mAb对NK细胞表面相应分子进行封闭,配对样本t检验比较抗体封闭前后NK细胞对ECV304细胞的杀伤活性相比差异有统计学意义（t=-4.860,P=0.002）,anti-KIR2DL1 mAb增强NK细胞对ECV304的杀伤活性。双变量相关分析示个体KIR2DL1表达率与NK细胞对ECV304的杀伤率存在负相关（rs=-0.994,P=0.000）。结论1.ECV304细胞在mRNA水平表达MICA/B,ULBP1-3,但在蛋白水平未检测到上述分子的表达。流式细胞仪检测结果显示1.63ug/ml CSA及2ug/ml作用24小时后的ECV304细胞表面不表达NKG2D的配体MICA、MICB、ULBP1-3。PCR-SSP法检测ECV304细胞HLA-A,B,Cw基因型为Al,-;B18,-;Cw5,-。HLA分型表明,ECV304表达KIR2DL1的配体,而不表达KIR2DL2/3、KIR3DL1的配体。2.8例健康供者NK细胞KIR2DL1表达率有较大差异,对ECV304细胞的杀伤活性也有不同,双变量相关分析示个体KIR2DL1表达率与NK细胞对ECV304的杀伤率存在负相关（rs=-0.994,P=0.000）。以anti-KIR2DL1 mAb封闭NK表面KIR2DL1受体,杀伤率均有不同程度的上升,用配对样本t检验,抗体封闭前后杀伤率差异有统计学意义（t=-4.860,P=0.002）。3.个体KIR2DL1表达率影响NK细胞对ECV304杀伤活性。目前已知的NKG2D配体MICA/B、ULBP1-3不参与NK细胞对ECV304细胞的杀伤。本研究的创新点本研究结果显示,同种异体NK细胞对静脉内皮细胞有杀伤作用,HLA-KIR分子错配是杀伤主要分子机制。研究价值根据供受者的HLA-KIR分子的表达状态和匹配程度选择供者。
论文目录
相关论文文献
- [1].乌司他丁对呼吸机相关性肺炎患者NK细胞含量的影响[J]. 中外女性健康研究 2019(24)
- [2].自身免疫病病人外周血NK细胞检测的意义[J]. 中国实验诊断学 2020(02)
- [3].全麻复合硬膜外麻醉对肺癌根治术患者外周血T细胞亚群及NK细胞活性的影响[J]. 实用癌症杂志 2020(02)
- [4].NK细胞在慢性粒细胞白血病中的作用及停药进展[J]. 临床血液学杂志 2020(03)
- [5].NK细胞治疗多发性骨髓瘤的研究进展[J]. 现代肿瘤医学 2020(19)
- [6].异基因造血干细胞移植后NK细胞重建与急性移植物抗宿主病相关性的研究[J]. 中国实验血液学杂志 2017(02)
- [7].T细胞亚群与NK细胞在初诊非小细胞肺癌患者外周血中的水平以及与预后的相关性分析[J]. 海军医学杂志 2017(02)
- [8].骨髓增生异常综合征患者外周血NK细胞亚型和功能分子变化的研究[J]. 中国实验血液学杂志 2017(03)
- [9].腹膜透析对终末期肾病患者T细胞亚群和NK细胞水平的影响[J]. 实用临床医药杂志 2017(15)
- [10].NK细胞负向调控适应性免疫应答研究进展[J]. 中国免疫学杂志 2016(06)
- [11].传染性单核细胞增多症患儿血淋巴细胞亚群及NK细胞的变化分析[J]. 中华医院感染学杂志 2016(20)
- [12].舒尼替尼联合NK细胞对肾透明细胞癌细胞株的协同杀伤作用及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版) 2015(04)
- [13].NK细胞在不明原因复发性流产诊治研究中的意义[J]. 黑龙江医学 2015(06)
- [14].阿托伐他汀对人NK细胞杀伤结肠癌细胞的影响及其机制研究[J]. 中国免疫学杂志 2017(02)
- [15].活动期类风湿关节炎患者外周血T、B淋巴细胞及NK细胞表达变化的意义[J]. 中国医药导报 2017(11)
- [16].套细胞淋巴瘤患者外周血NK细胞数目变化及其临床意义[J]. 中国实验血液学杂志 2017(03)
- [17].食管癌患者手术前后外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞的测定及临床意义[J]. 医学研究杂志 2017(06)
- [18].NK细胞治疗血液系统恶性肿瘤的研究进展[J]. 检验医学与临床 2016(09)
- [19].带状疱疹患者外周血T细胞及NK细胞检测[J]. 中国麻风皮肤病杂志 2014(11)
- [20].NK细胞与脓毒血症的相关性研究进展[J]. 世界中西医结合杂志 2015(02)
- [21].鼻咽癌患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞活性的检测及其意义[J]. 微创医学 2015(02)
- [22].康艾注射液对鼻咽癌首次放疗或放化疗患者外周血NK细胞活性的影响[J]. 山东医药 2013(44)
- [23].企业开放式创新社区网络创新绩效内部影响因素分析——NK模型视角[J]. 科技进步与对策 2014(18)
- [24].布鲁菌病患者外周血NK细胞和T淋巴细胞亚群的变化[J]. 中华实验和临床感染病杂志(电子版) 2014(05)
- [25].NK细胞慢性淋巴增殖性疾病一例报告[J]. 大家健康(学术版) 2014(08)
- [26].企业隐性知识管理的NK模型分析[J]. 情报杂志 2011(04)
- [27].低丙种球蛋白血症伴NK细胞减少:1例原发性免疫缺陷病患儿4年随访(英文)[J]. 临床儿科杂志 2011(07)
- [28].索拉非尼治疗前后原发性肝癌患者外周血T淋巴细胞和NK细胞的变化及临床意义[J]. 广东医学 2010(06)
- [29].爆发性肝炎小鼠中髓系衍生抑制性细胞对NK细胞活性影响的研究[J]. 浙江大学学报(医学版) 2010(04)
- [30].千佛菌对肺癌小鼠IL-2和NK细胞活性影响的实验研究[J]. 四川中医 2009(05)
标签：细胞论文; 脐静脉内皮细胞论文; 类分子论文; 杀伤细胞免疫球蛋白样受体论文;