论文摘要
肝细胞肝癌（HCC）,简称肝癌,是恶性程度极高的恶性肿瘤,素有“癌王”之称,目前临床对肝癌的诊治仍然十分困难,仍以手术治疗和放化疗为主。近年来,以抗体为基础的导向治疗方法的研究为肿瘤的诊治带来了生机,先后出现了以单链抗体、二硫键抗体、Fab抗体等抗体形式为导向载体,以细胞因子、毒素分子、超抗原、放射性核素为“弹头”的导向治疗制剂。 在单链抗体、二硫键抗体、Fab抗体这几种导向载体中,二硫键抗体、Fab抗体因重链和轻链之间有二硫键相连,稳定性较高,但表达困难或较难获得较高产量;单链抗体有较成熟的原核表达系统,产量较高,但稳定性较差。为了解决这一问题,我们构建了抗肝癌单链二硫键稳定抗体（这一新型抗体形式）靶向超抗原SEA（D227A）分子,以提高抗肝癌抗体靶向超抗原SEA（D227A）分子的产量和稳定性。单链二硫键稳定抗体（single-chain disulfide-stabilized Fv,scdsFv）是在单链抗体的基础上,在抗体的重链可变区和轻链可变区的框架区分别突变出一个半胱氨酸,以完整的一条链形式表达,这样可在轻、重链可变区之间形成二硫键,以达到提高稳定性和产量的目的。 本研究通过连接肽将抗肝癌二硫键稳定抗体的VH、VL连接起来,构建了单链二硫键稳定抗体,这一最具应用前景的Fv抗体形式,并将其同超抗原SEA（D227A）融合,构建了抗肝癌scdsFv-SEA（D227A）重组表达质粒,以期提高产量和稳定性。 ScdsFv-SEA（D227A）重组表达质粒经IPTG诱导后,在大肠杆菌BL21plusS中以包涵体形式表达,表达量占菌体蛋白的30%左右。包涵体经充分洗涤和变性、复性后,用Q Sepharose HP和Hiprep 26/60 Sephacryl S-200 HR进行纯化,纯度达90%以上,BCA蛋白定量显示每升诱导菌液的产量高达60mg,提高了产量。
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相关论文文献
- [1].重组金黄色葡萄球菌肠毒素A突变体D227A蛋白的表达、纯化和鉴定[J]. 海峡药学 2013(02)
标签：单链二硫键稳定抗体论文; 产量论文; 超抗原论文; 稳定性论文;