论文摘要
目的:克隆survivin启动子构建survivin启动子调控的siRNA真核表达载体,探讨survivin启动子在在肿瘤特异性基因治疗中的应用。 方法:（1）以HeLa细胞基因组DNA为模板,PCR扩增survivin启动子,回收扩增产物并插入pGEM-TEasy载体（T/Surp）,测序鉴定。（2）SacⅠ和HindⅢ分别双酶切T/Surp载体和pGL3Basic,回收survivin启动子酶切片断及pGL3Basic酶切片断,连接回收产物构建携带survivin启动子pGL3Basic真核表达载体（pGL3Basic/Surp）,酶切鉴定。（3）纯化pGL3Basic/Surp质粒,用脂质体法转染HeLa细胞和正常血管内皮细胞ECV304,48h后收集转染细胞与荧光素酶底物反应,检测荧光素酶活性。（4）合成两对干涉stathmin基因的siRNA寡核苷酸链退火形成双链,连接入经BamHI和HindⅢ双酶切后的pSilencer4.1-CMV neo真核表达载体（pSilencer4.1-CMV neo-S1和pSilencer4.1-CMV neo-S2）。PCR扩增带有EcoRI和BamHI酶切位点的survivin启动子,双酶切后连接入pSilencer4.1-CMV neo-S1和pSilencer4.1-CMV neo-S2(pSilencer4.1-Surp
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