孕牛血清早孕因子生物活性的研究及其分离纯化

论文摘要

早孕因子（early pregnancy factor,EPF）是存在于妊娠早期母体血清中的一种免疫抑制蛋白。可以用于预测早期胚胎死亡与流产、鉴定胚胎移植效果、监测胎儿的状态以及食道癌诊断。方法:通过玫瑰花环抑制试验（RIT）检测孕牛血清早孕因子的活性,分别对12头体格状况相似,饲养状况一致的不同孕期孕牛（孕期1-2月5头,3-5月4头,6-9月2头）和4头未怀孕牛血液做对照,分别检测其血液中早孕因子活性,对其进行形成花环滴度分析,对比得出,在牛怀孕何时能够达到早孕因子的最强活性和最大量;采集能够分泌早孕因子最大量时期的健康孕牛血清,分别通过DEAE-Sepharos F. F离子交换层析,CM–Sepharose F.F离子交换层析,Con A-Sepharose 4B亲和层析和Heparin-Sepharose Cl 6B亲和层析,来获得早孕因子。用考马斯亮蓝法测定蛋白质的浓度,采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）测定其分子量。结果显示:妊娠3-5个月的孕牛血清中早孕因子较其他时期的多;分离纯化出的早孕因子分子量为53.6Ku。从孕牛血清中分离得到纯化的早孕因子,为进一步研制牛流产及不孕症的早孕因子单克隆抗体快速检测胶体金

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 早孕因子研究进展
• 1.1 EPF 的分泌来源及存在形式
• 1.2 EPF 本质及其特性
• 1.3 EPF 的作用机制
• 1.3.1 免疫抑制作用
• 1.3.2 生长调节作用
• 1.4 早孕因子的应用
• 1.4.1 在超早期妊娠诊断中的应用
• 1.4.2 检测胚胎的成活情况
• 1.4.3 检测妊娠中断
• 1.4.4 分析不孕情况
• 1.4.5 肿瘤诊断和治疗方面的应用
• 1.5 其他方面的应用
• 1.6 小结及展望
• 1.7 实验所用的原理
• 1.7.1 玫瑰花环抑制试验原理
• 1.7.2 早孕因子分离纯化的原理
• 1.8 研究目的和意义
• 1.9 创新点
• 第二章 玫瑰花环抑制试验对孕牛血清早孕因子生物活性的鉴定
• 2.1 材料和试剂
• 2.1.1 样本采集
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 玫瑰花环形成率检测
• 2.2.2 数据分析
• 2.3 实验结果及分析
• 2.3.1 玫瑰花环抑制滴度
• 2.3.2 玫瑰花环形成情况
• 2.4 讨论
• 2.5 小结
• 第三章 孕牛血清中早孕因子的分离与纯化
• 3.1 材料
• 3.1.1 实验材料
• 3.1.2 主要试剂
• 3.2 方法
• 3.2.1 EPE 分离与纯化
• 3.2.2 用考马斯亮蓝法（王孝平等2009）测定蛋白含量
• 3.2.3 纯化结果用SDS-PAGE 电泳法鉴定纯化结果
• 3.3 结果
• 3.3.1 孕牛血清中 EPF 的纯化结果
• 3.3.2 孕牛血清蛋白含量分析结果
• 3.3.3 SDS-PAGE 电泳结果
• 3.4 分析
• 3.5 小结
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介