论文摘要
病原菌侵染宿主过程中，抑制宿主防御反应是极为关键的一步，病原菌借此得以在宿主内存活及繁殖。很好的一个例子就是假单胞耶尔森菌分泌的效应蛋白AvrRpt2对宿主“基因对基因”防御反应的抑制。效应蛋白AvrRpt2是一种蛋白酶，经三型信号分泌系统进入宿主后识别并酶切宿主蛋白RIN4。RIN4的降解使宿主抗病蛋白RPM1的防御反应，并无法检测假单胞耶尔森菌中另外的两种效应蛋白AvrB and AvrRpm1。效应蛋白AvrRpt2在病原菌内以酶原形式合成，以保护不对自身产生毒害，进入宿主后才被其分子伴侣活化。虽然AvrRpt2的遗传学和生物化学性状已经研究得较为透彻，对它活化以及催化底物的机制仍不清楚。为了对这些问题予以解答，我们目前致力于解决AvrRpt2的晶体结构以及其与ROC1、RIN4的复合物晶体结构。为获得AvrRpt2-ROC1复合物晶体，我们将AvrRpt2蛋白催化中心点突变，与ROC1混合后进行纯化。遗憾的是在凝胶层析的过程中，两者并没有形成稳定的复合物。这提示ROC1对AvrRpt2的活化作用可能是通过瞬时作用完成的或两者间作用微弱。对限制性蛋白酶切得到的蛋白及多种AvrRpt2蛋白质片段进行纯化的结果显示，AvrRpt2全长状态更易于结晶。尽管目前所获得的AvrRpt2蛋白质晶体大小还不足以进行数据收集，此蛋白质晶体结构的解析将为相关效应蛋白的晶体学研究提供有效的实验基础。