L-选择素及配体在胚胎植入过程中的表达及作用研究

论文摘要

目的胚胎植入是人类和哺乳类动物成功妊娠的关键环节,此过程取决于胚泡与子宫内膜间协同反应,即胚卵于“着床窗”发育成囊胚（早期胚泡）,脱透明带后,其滋养层细胞与子宫内膜蜕膜化细胞相互作用,诱导胚胎植入过程中的定位、黏附和侵入等。“着床窗”受众多调控因子调节,而具体分子作用机制尚未完全清楚。近年来人们逐渐认识到胚卵上黏附分子与子宫内膜上皮细胞相应的糖蛋白配体结合是胚胎植入过程中重要的分子事件之一[1]。而胚卵上的黏附分子L-选择素与其子宫内膜上的配体SLeX（唾液酸化路易斯寡糖X）及SLeX关键合成酶FucT-VII（α-1,3岩藻糖基转移酶）的表达和功能研究目前尚无详细的相关报导,因此探讨三者的表达规律及它们对胚胎植入的影响,有助于进一步明确胚泡与子宫内膜间协同反应的分子机制。方法第一部分1.运用FQ-PCR对妊娠d14小鼠胚卵L-选择素mRNA的表达进行定量分析。2.运用IF对妊娠d14小鼠胚卵L-选择素蛋白的表达进行定位和半定量分析。3.分别向妊娠第14天（d14）小鼠子宫注射L-选择素单克隆抗体,观察并统计小鼠子宫植入的胚胎数,初步分析L-选择素对胚胎植入的影响。第二部分1.运用RT-PCR对妊娠d15小鼠子宫内膜FucT-VII mRNA的表达进行半定量分析。2.运用免疫组织化学方法对妊娠d15小鼠子宫内膜上SLeX蛋白的表达进行定位分析。3.运用Western Blot对妊娠d15小鼠子宫内膜上SLeX蛋白的表达进行定量分析。4.分别向妊娠d14小鼠子宫注射SLeX单克隆抗体,观察并统计小鼠子宫植入的胚胎数,分析SLeX蛋白对胚胎植入的影响。结果第一部分1.FQ-PCR:L-选择素mRNA在小鼠各期胚卵中均有表达,且随着胚卵分化成熟,其表达呈逐渐增强趋势,于胚泡期表达最强（P<0.05）。2.IF:L-选择素在单细胞期和四细胞期胚卵有少量表达,主要在细胞质中表达;桑椹胚期L-选择素表达于胚卵周边区,表达增强,而在胚泡期L-选择素表达于滋养层细胞膜上,且表达最强（P<0.05）。3.体内L-选择素抗体干预:小鼠子宫实验侧（经L-选择素单克隆抗体干预）植入的胚胎数较对照侧（经等量生理盐水干预）明显减少,且随着抗体浓度增加,子宫实验侧植入的胚胎数呈减少趋势（P<0.05）。第二部分1.RT-PCR:妊娠d15小鼠子宫内膜FucT-VII mRNA均有表达,呈逐渐增高再下降的趋势,其中妊娠d4表达最强。2.免疫组织化学:SLeX蛋白在妊娠d15小鼠子宫内膜腔上皮和腺上皮均有表达。3.Western Blot:妊娠d15小鼠子宫内膜SLeX蛋白均有表达,表达量随妊娠天数的增加而增加,于妊娠d4达高峰,而后下降（P<0.05）。4.体内SLeX抗体干预:小鼠子宫实验侧（经SLeX单克隆抗体干预）植入的胚胎数较对照侧（经等量生理盐水干预）明显减少,且随着抗体浓度增加,子宫实验侧植入的胚胎数呈减少趋势（P<0.05）。结论妊娠d13小鼠胚卵上L-选择素均有表达,其配体SLeX及SLeX关键合成酶FucT-VII在子宫内膜上也均有表达。由此推测L-选择素可能作为信号分子一方面调节胚卵的分化成熟,另一方面通过调节胞外分泌,释放相关细胞因子作用于子宫内膜上的配体或受体,远程调节子宫内膜的容受性,促进两者的协同反应,为胚胎植入做好准备。妊娠d4小鼠子宫内膜SLeX及SLeX关键合成酶FucT-VII的表达均达高峰,同时胚卵L-选择素的表达也最强。我们采用体内L-选择素抗体封闭L-选择素的活性,发现伴随L-选择素抗体浓度增加,对胚胎植入的抑制作用越明显。为进一步验证SLeX在胚胎植入中的作用,我们采用体内SLeX抗体封闭SLeX的活性,结果同样显示伴随抗体浓度增加,对胚胎植入的抑制作用越明显。由此我们认为“着床窗”胚泡上强表达的L-选择素与子宫内膜上强表达的配体SLeX通过配体-受体形式介导胚泡与子宫内膜间信息转导,这可能是胚胎植入的关键一步,进而诱发胚泡与子宫内膜的定位、黏附及侵入过程。

论文目录

• 符号说明
• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一部分 小鼠胚卵L-选择素的表达及作用研究
• 前言
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第二部分 早孕小鼠子宫内膜SLeX的表达及作用研究
• 前言
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 全文总结
• 参考文献
• 文献综述
• 致谢
• 攻读学位期间的研究成果及发表的学术论文目录