靶向PRL-3基因的miR-495、miR-551a及其抗胃癌细胞侵袭转移研究

论文摘要

目的:在胃癌中预测并验证可能调控腹膜转移相关基因PRL-3表达的microRNA（miRNA）分子。方法:通过生物信息学技术，运用4个miRNA靶基因预测软件，结合相关文献，选取9条高度可能靶向PRL-3的miRNA分子，用qRT-PCR方法在胃癌组织和胃癌细胞系SGC7901、MKN45、MKN28、BGC823及正常胃黏膜组织和胃黏膜上皮细胞系GES-1、HFE-145中检测这9条miRNA分子表达情况，得出两条在胃癌组织及胃癌细胞中表达下调最明显的miRNA分子（miRNA-551a、miRNA-495），设计并合成这2种miRNA分子化学合成类似物miRNA mimics，分别用Lipofectamine2000TM脂质体将miRNAmimics瞬时转染到SGC7901、MKN28细胞，设立空白对照组及阴性对照组，用qRT-PCR技术检测转染24小时后PRL-3mRNA的表达情况，用Western Blot方法检测转染后细胞中PRL-3蛋白水平变化。Transwell小室实验检测转染后SGC7901、MKN28细胞侵袭及转移能力变化。结果:胃癌细胞SGC7901和MKN28在瞬时转染miR-495/miR-551a mimics后，均明显抑制了PRL-3蛋白及mRNA的表达，tranwell侵袭迁移实验表明，在转染miR-495/miR-551a mimics后，胃癌细胞的侵袭和迁移能力均明显下降。结论: miRNA-551a、miRNA-495为靶向PRL-3基因的miRNA分子，这丰富了miRNAs及PRL-3基因的调控机制研究，并为今后运用miRNA治疗进展期胃癌提供了有力的理论依据。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 符号说明
• 第1章 引言
• 第2章 靶向 PRL-3 的 microRNA 分子预测
• 2.1 实验材料和仪器
• 2.1.1 细胞株和胃组织
• 2.1.2 实验主要试剂
• 2.1.3 实验主要溶液的配制
• 2.1.4 实验主要仪器
• 2.2 方法
• 2.2.1 生物信息学软件分析可能调控 PRL-3 基因的 miRNA 分子
• 2.2.2 细胞培养、复苏和冻存
• 2.2.3 Western Blot 检测胃癌组织及胃癌细胞系中 PRL-3 蛋白表达情况
• 2.2.4 Real-time PCR 检测组织及细胞中 miRNA 及 PRL-3 mRNA 表达情况
• 2.2.5 统计学分析
• 2.3 结果
• 2.3.1 靶向 PRL-3 基因的 miRNA 分子预测结果
• 2.3.2 胃癌细胞株及正常胃黏膜上皮细胞株中 PRL-3 蛋白及 mRNA 表达情况
• 2.3.3 miR-495 和 miR-551a 在胃癌中呈明显低表达
• 第3章 MiR-495 及 miR-551a 沉默 PRL-3 基因表达及抑制胃癌细胞侵袭迁移能力的研究
• 3.1 实验材料和仪器
• 3.1.1 细胞株
• 3.1.2 实验主要仪器
• 3.1.3 实验主要材料和试剂
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 设计并合成 miR-495 和 miR-551a 化学类似物 miRNA mimics
• 3.2.2 miRNA mimics 瞬时转染胃癌细胞株 SGC7901、MKN28
• 3.2.3 荧光实时定量 RT-PCR 检测瞬时转染后细胞内 PRL-3 mRNA 表达变化
• 3.2.4 Western Blot 检测瞬时转染 miRNA mimics 后细胞内 PRL-3 蛋白表达变化
• 3.2.5 Transwell 小室实验检测瞬时转染 miRNA mimics 后细胞的侵袭迁移能力变化情况
• 3.2.6 统计学处理
• 3.3 实验结果
• 3.3.1 荧光倒置显微镜观察细胞转染 miRNA mimics 后带上 FAM 荧光
• 3.3.2 miR-495 和 miR-551a 抑制胃癌细胞 PRL-3 基因表达
• 3.3.3 miR-495 和 miR-551a 转染后胃癌细胞侵袭转移能力下降
• 第4章 讨论
• 第5章 结论
• 致谢
• 参考文献
• 攻读学位期间的研究成果
• 综述
• 参考文献